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金丽假交替单胞菌JG1抑菌机理研究

摘要第1-8页
Abstract第8-18页
第一章 文献综述第18-47页
 1 假交替单胞菌概述第18-23页
   ·假交替单胞菌的一般特征第18-21页
   ·金丽假交替单胞菌的一般特征第21页
   ·假交替单胞菌的生态学研究意义第21-23页
     ·水产养殖病害的防治第21-22页
     ·形成生物被膜防止污损的发生第22页
     ·赤潮的防治第22-23页
 2 假交替单胞菌产生的生物活性物质第23-29页
   ·小分子活性物质第23-27页
     ·卤化的小分子活性物质第23-25页
     ·非卤化的小分子活性物质第25-27页
   ·大分子活性物质第27-29页
 3 假交替单胞菌的全基因组测序及分析第29-45页
   ·被囊假交替单胞菌 D2 的全基因组分析第30-34页
     ·生物活性物质的合成第31页
     ·对表面的粘附及生物被膜的形成第31-32页
     ·对环境压力的感知第32页
     ·营养的获取第32-33页
     ·对多种真核生物表面多聚物的降解第33-34页
   ·游海假交替单胞菌 TAC125 的全基因组分析第34-40页
     ·基因组结构第35-37页
     ·蛋白质组的一般特征第37页
     ·代谢特征第37-38页
     ·对氧的反应第38-40页
   ·假交替单胞菌 SM9913 的全基因组分析第40-45页
     ·基因组的一般特征第41-42页
     ·转座元件第42-44页
     ·对活性氧的敏感性第44页
     ·对药物及重金属的抵抗能力第44页
     ·鞭毛和运动性第44-45页
 4 本论文的研究目的和意义第45-47页
第二章 金丽假交替单胞菌 JG1 抑菌活性检测及抑菌组分分析第47-57页
 1 实验材料与仪器第47-49页
   ·菌株第47-48页
   ·培养基第48-49页
   ·主要仪器第49页
 2 实验方法第49-50页
   ·菌株 JG1 抑菌谱的测定第49页
   ·有机溶剂萃取法对菌株 JG1 抑菌活性组分的分析第49-50页
   ·不同培养时间对菌株 JG1 胞外抑菌蛋白的影响第50页
     ·不同培养时间 JG1 胞外产物的制备第50页
     ·不同培养时间 JG1 胞外产物的抑菌活性检测第50页
 3 实验结果第50-56页
   ·菌株 JG1 对不同菌株的抑菌谱第50-51页
   ·菌株 JG1 抑菌活性组分分析第51-55页
   ·不同培养时间对菌株 JG1 胞外抑菌蛋白的影响第55-56页
 4 讨论第56-57页
第三章 金丽假交替单胞菌 JG1 胞外抑菌蛋白的分离纯化、序列分析及重组表达研究第57-81页
 1 实验材料及仪器第57-59页
   ·菌株及质粒第57-59页
   ·培养基第59页
   ·主要仪器第59页
 2 实验方法第59-66页
   ·菌株 JG1 胞外产物的提取第59页
   ·分步硫酸铵沉淀法对菌株 JG1 的胞外蛋白的初步纯化第59-60页
     ·分步硫酸铵沉淀法第59-60页
     ·Bradford 法测定蛋白含量第60页
     ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测第60页
     ·各部分胞外产物抑菌活性检测第60页
   ·菌株 JG1 胞外蛋白的 SDS-PAGE 及胶内活性检测第60-61页
     ·胞外蛋白的 SDS-PAGE 检测第60-61页
     ·胶内活性检测第61页
   ·电洗脱法对菌株 JG1 抑菌蛋白的纯化及活性检测第61-63页
     ·电洗脱仪 Model 422 Electro-Eluter (Bio-Rad)的组装第61-62页
     ·电洗脱法对菌株 JG1 抑菌蛋白的纯化第62-63页
     ·纯化后抑菌蛋白的 SDS-PAGE 检测及胶内活性检测第63页
   ·对菌株 JG1 抑菌蛋白的 De novo 测序第63页
   ·菌株 JG1 抑菌蛋白的序列分析第63-64页
   ·菌株 JG1 抑菌蛋白在大肠杆菌 BL21 中的重组表达第64-65页
     ·菌株 JG1 抑菌蛋白的克隆及 pET 系列表达质粒的构建第64页
     ·表达质粒 pBAD/Myc-HisB 及 pRSFDuet-1 对抑菌蛋白 PfaP 的重组表达第64-65页
     ·菌株 JG1 抑菌蛋白的诱导表达、活性检测及 SDS-PAGE第65页
     ·重组表达抑菌蛋白的纯化、活性检测及 SDS-PAGE第65页
   ·过氧化氢酶对菌株 JG1 抑菌蛋白活性的影响第65-66页
 3 实验结果第66-77页
   ·分步硫酸铵沉淀法对菌株 JG1 的胞外蛋白的初步纯化第66-67页
   ·菌株 JG1 胞外蛋白的 SDS-PAGE 及胶内活性检测第67-68页
   ·纯化后抑菌蛋白的 SDS-PAGE 及胶内活性检测第68-69页
   ·抑菌蛋白的 De novo 测序及序列分析第69-72页
   ·菌株 JG1 抑菌蛋白在大肠杆菌 BL21 中的重组表达第72-76页
     ·抑菌蛋白 PfaP 的重组表达及活性检测第72-75页
     ·重组表达的抑菌蛋白的纯化、活性检测及 SDS-PAGE第75-76页
   ·过氧化氢酶对菌株 JG1 抑菌蛋白活性的影响第76-77页
 4 讨论第77-81页
   ·抑菌蛋白 PfaP 的 L-氨基酸氧化酶活性预测第77-79页
   ·抑菌蛋白 PfaP 的外源重组表达第79-81页
第四章 金丽假交替单胞菌 JG1 抑菌小分子化合物的分离纯化及性质研究第81-93页
 1 实验材料及仪器第81-82页
   ·菌株第81页
   ·培养基第81-82页
   ·主要仪器第82页
 2 实验方法第82-85页
   ·菌株 JG1 发酵液的制备及乙酸乙酯萃取法对小分子化合物的粗提第82页
   ·小分子化合物的分离纯化及结构测定第82-83页
   ·小分子化合物抑菌活性的测定第83-84页
     ·TLC 板生物自显影法第83页
     ·微量液体法第83-84页
     ·TLC 板生物自显影法对化合物 1-5 抑菌谱的测定第84页
   ·小分子化合物最小抑菌浓度(MIC)的测定第84-85页
     ·纸片法第84页
     ·微量稀释法第84-85页
 3 实验结果第85-90页
   ·抑菌小分子化合物的结构测定第85-87页
     ·初步分离的 12 组分的抑菌活性检测第85页
     ·十种小分子化合物的结构第85-87页
   ·抑菌小分子化合物的活性检测第87-90页
     ·小分子化合物抑菌活性检测第87页
     ·微量液体法对化合物 1-5 抑菌活性的检测第87-89页
     ·化合物 1-5 抑菌谱的测定第89-90页
   ·小分子化合物最小抑菌浓度的测定第90页
     ·纸片法对小分子化合物最小抑菌浓度的测定第90页
     ·微量稀释法对小分子化合物最小抑菌浓度的测定第90页
 4 讨论第90-93页
第五章 金丽假交替单胞菌 JG1 全基因组测序及分析第93-116页
 1 实验材料及仪器第93-94页
   ·菌株第93-94页
   ·培养基第94页
   ·主要仪器第94页
 2 实验方法第94-97页
   ·菌株 JG1 基因组 DNA 的提取第94页
   ·菌株 JG1 基因组 DNA 的质量检测第94页
   ·菌株 JG1 基因组测序、组装及基因功能预测第94-95页
   ·菌株 JG1 基因组序列分析第95页
   ·菌株 JG1 密度感应系统信号分子(AHL)的检测第95-96页
     ·双层平板法第95-96页
     ·琼脂扩散法第96页
   ·菌株 JG1 密度感应淬灭活性的检测第96-97页
     ·液体法第96-97页
     ·平板法第97页
 3 实验结果与讨论第97-114页
   ·菌株 JG1 基因组 DNA 的提取及检测第97-98页
   ·菌株 JG1 基因组的一般特征及与其他假交替单胞菌基因组的比较第98-104页
   ·参与抑菌物质生物合成的相关基因第104-107页
     ·抑菌蛋白第104页
     ·对羟基苯甲酸的生物合成第104页
     ·反式桂皮酸的生物合成第104-105页
     ·6-溴吲哚-3-乙酸的生物合成第105-106页
     ·几丁质酶第106-107页
     ·次级代谢产物相关基因第107页
   ·菌株 JG1 密度感应系统及淬灭活性第107-110页
     ·菌株 JG1 密度感应信号分子检测第107-109页
     ·密度感应系统相关基因第109页
     ·菌株 JG1 的密度感应淬灭活性及相关基因第109-110页
   ·磷的获取及环境压力的适应第110-111页
     ·磷的获取相关基因第110页
     ·适应环境压力的相关基因第110-111页
   ·运动性及分泌特征第111-114页
     ·运动性相关基因第111-113页
     ·分泌特性第113-114页
   ·抗药性及转运系统第114页
 4 小结第114-116页
第六章 结论第116-119页
 1 全文总结第116-118页
 2 主要创新点第118-119页
参考文献第119-131页
附录 溶液配方第131-133页
致谢第133-134页
个人简历第134页
已发表的学术成果第134-136页

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