| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-10页 |
| 缩略词 | 第10-15页 |
| 1． 绪论 | 第15-39页 |
| 1．1 研究意义与背景 | 第15-16页 |
| 1．2 aFGF的研究进展 | 第16-23页 |
| 1．2．1 aFGF的结构及特点 | 第16-18页 |
| 1．2．2 aFGF的受体分类 | 第18-20页 |
| 1．2．3 aFGF的信号传导 | 第20-21页 |
| 1．2．4 aFGF的生物学活性 | 第21-22页 |
| 1．2．5 aFGF的临床应用潜力 | 第22-23页 |
| 1．3 基因工程表达系统的特点 | 第23-27页 |
| 1．3．1 细菌 | 第24页 |
| 1．3．2 酵母 | 第24-25页 |
| 1．3．3 昆虫细胞 | 第25-26页 |
| 1．3．4 哺乳动物细胞 | 第26页 |
| 1．3．5 转基因动物 | 第26-27页 |
| 1．3．6 转基因植物 | 第27页 |
| 1．4 药用蛋白质的改造方法 | 第27-33页 |
| 1．4．1 蛋白质的化学修饰 | 第27-29页 |
| 1．4．2 定点突变 | 第29-31页 |
| 1．4．3 异源系统中外源蛋白的糖基化修饰 | 第31-33页 |
| 1．5 研究目标与整体设计 | 第33页 |
| 1．5．1 研究目标 | 第33页 |
| 1．5．2 研究思路构架 | 第33页 |
| 1．6 研究内容与技术路线 | 第33-38页 |
| 1．6．1 haFGF基因的克隆 | 第33-34页 |
| 1．6．2 haFGF表达系统的构建 | 第34-37页 |
| 1．6．3 不同表达系统发酵条件的建立与表达产物的与分离纯化 | 第37页 |
| 1．6．4 rhaFGF的性质鉴定 | 第37-38页 |
| 1．7 本研究的创新性 | 第38-39页 |
| 2 haFGF基因的克隆 | 第39-45页 |
| 2．1 材料和方法 | 第39-42页 |
| 2．1．1 材料 | 第39页 |
| 2．1．2 方法 | 第39-42页 |
| 2．2 结果与分析 | 第42-45页 |
| 2．2．1 haFGF编码区cDNA的扩增结果 | 第42-43页 |
| 2．2．2 haFGF基因的克隆 | 第43页 |
| 2．2．3 重组质粒提取与测序 | 第43-45页 |
| 3 E．coli/haFGF表达系统构建及其表达产物的纯化 | 第45-54页 |
| 3．1 材料与方法 | 第45-49页 |
| 3．1．1 材料 | 第45-46页 |
| 3．1．2 方法 | 第46-49页 |
| 3．2 结果与分析 | 第49-54页 |
| 3．2．1 pET30a（+）-haFGF重组质粒的构建及鉴定 | 第49页 |
| 3．2．2 工程菌株BL21（DE3）/pET30a（+）-haFGF的筛选 | 第49-50页 |
| 3．2．3 haFGF在大肠杆菌中的表达及鉴定 | 第50-52页 |
| 3．2．4 rhaFGF（E）的分离纯化 | 第52-53页 |
| 3．2．5 大肠杆菌表达的rhaFGF（E）的纯化效率 | 第53-54页 |
| 4 S．cerevisiae/haFGF系统的构建及其表达产物纯化 | 第54-62页 |
| 4．1 材料与方法 | 第54-58页 |
| 4．1．1 材料 | 第54-55页 |
| 4．1．2 方法 | 第55-58页 |
| 4．2 结果与分析 | 第58-62页 |
| 4．2．1 pYES2-haFGF重组质粒的构建及鉴定 | 第58-59页 |
| 4．2．2 S．cerevisiae重组工程菌株的构建与筛选 | 第59页 |
| 4．2．3 rhaFGF在S．cerevisiae/haFGF中的表达 | 第59-60页 |
| 4．2．4 rhaFGF（S）的分离纯化 | 第60-62页 |
| 5 P．pastoris/haFGF表达系统的构建及其表达产物的纯化 | 第62-73页 |
| 5．1 材料与方法 | 第62-66页 |
| 5．1．1 材料 | 第62-64页 |
| 5．1．2 方法 | 第64-66页 |
| 5．2 结果与分析 | 第66-73页 |
| 5．2．1 pPIC9K-haFGF重组质粒的构建及鉴定 | 第66-67页 |
| 5．2．2 P．pastoris/pPIC9K-haFGF工程菌株的构建与筛选 | 第67页 |
| 5．2．3 haFGF在P．pastoris中的表达 | 第67-70页 |
| 5．2．4 rhaFGF（P）的分离纯化 | 第70-72页 |
| 5．2．5 P．pastoris表达的rhaFGF（P）纯化效率 | 第72-73页 |
| 6 rhaFGF（P）的特性测定 | 第73-82页 |
| 6．1 材料与方法 | 第73-75页 |
| 6．1．1 材料 | 第73页 |
| 6．1．2 方法 | 第73-75页 |
| 6．2 结果与分析 | 第75-82页 |
| 6．2．1 rhaFGF（P）的活性 | 第75-76页 |
| 6．2．2 rhaFGF（P）的储藏稳定性 | 第76-77页 |
| 6．2．3 rhaFGF（P）对血管细胞生长的影响 | 第77-82页 |
| 7 讨论 | 第82-98页 |
| 7．1 aFGFmRNA的多样性与其功能的多样性的关系 | 第82-83页 |
| 7．2 不同转化方法的效率及评价 | 第83-85页 |
| 7．2．1 CaCl2法 | 第83-84页 |
| 7．2．2 氯化锂法 | 第84页 |
| 7．2．3 电转化法 | 第84-85页 |
| 7．3 大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的特点及其对haFGF表达的影响 | 第85-90页 |
| 7．3．1 E．coli表达系统 | 第85-86页 |
| 7．3．2 S．cerevisiae表达系统 | 第86页 |
| 7．3．3 P．pastoris表达系统 | 第86-88页 |
| 7．3．4 酵母表达系统表达的rhaFGF的糖基化修饰位点的预测 | 第88-90页 |
| 7．4 影响rhaFGF在P．pastoris中表达的因素 | 第90-92页 |
| 7．5 rhaFGF的纯化及纯化过程中存在的问题 | 第92-93页 |
| 7．5．1 蛋白质分离纯化的特点 | 第92页 |
| 7．5．2 实现蛋白质的分离纯化应解决的问题 | 第92-93页 |
| 7．6 rhaFGF（P）特性比较及其研究意义 | 第93-96页 |
| 7．6．1 生物活性比较 | 第93-94页 |
| 7．6．2 rhaFGF的储藏特性及提高rhaFGF稳定性的方法 | 第94-96页 |
| 7．7 rhaFGF（P）对血管细胞增殖能力的影响及其意义 | 第96-98页 |
| 8 结论与展望 | 第98-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-109页 |
| 附录1 攻博期间论文发表情况 | 第109-110页 |
| 附录2 测序结果 | 第110-122页 |
