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积累类胡萝卜素的绿藻类囊体膜蛋白组学研究

致谢第1-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-15页
第一章 引言第15-41页
   ·总体研究思路第15-17页
   ·β-胡萝卜素第17-19页
     ·β-胡萝卜素的分子结构第17-18页
     ·β-胡萝卜素的合成第18页
     ·β-胡萝卜素与光合作用第18-19页
   ·虾青素第19-26页
     ·虾青素的应用价值第21-22页
     ·虾青素的合成与抗逆第22页
     ·虾青素参与雨生红球藻抗逆仍存在争议和待解决的主要问题第22-26页
   ·三种绿藻与类胡萝卜素的积累第26-32页
     ·雨生红球藻第26-29页
     ·雨生红球藻蛋白质组与膜蛋白质组研究进展第29-30页
     ·盐藻第30-31页
     ·浒苔概述第31-32页
   ·类囊体膜蛋白第32-34页
     ·类囊体膜蛋白的组成第33页
     ·与类囊体膜蛋白结合的类胡萝卜素第33-34页
   ·蛋白质组研究技术第34-41页
     ·基于仪器分类的蛋白组研究的技术路线第34-35页
     ·基于所分析样品的蛋白组研究技术路线第35-36页
     ·定量蛋白质组学第36-37页
     ·类囊体膜蛋白组研究的特殊性第37页
     ·本研究中使用的蛋白组技术路线第37-41页
第二章 虾青素合成过程中雨生红球藻细胞比较蛋白组研究第41-78页
 引言第41-43页
   ·材料与方法第43-55页
     ·藻种与培养方法第43-45页
     ·细胞形态观测与细胞计数第45页
     ·虾青素提取和定量第45-46页
     ·77 K 低温荧光光谱测量第46页
     ·叶绿素荧光测量第46页
     ·可溶性蛋白提取第46-47页
     ·类囊体膜蛋白粗提第47页
     ·类囊体膜纯化第47-48页
     ·类囊体膜色素提取和分析第48页
     ·可溶性蛋白定量第48-49页
     ·SDS-PAGE 电泳检测可溶性蛋白提取质量第49-50页
     ·2D-DIGE 双向电泳第50-51页
     ·2D-DIGE 凝胶图像分析第51页
     ·连续蔗糖密度梯度离心分离类囊体膜复合体第51-52页
     ·超离后蛋白条带分层吸取以及 SDS-PAGE 电泳分析第52页
     ·类囊体膜 2D BN-SDS PAGE 差异蛋白分析第52-54页
     ·胶内蛋白酶解第54页
     ·胶内多肽萃取第54页
     ·使用 MALDI-TOF-TOF 二级质谱进行差异蛋白鉴定第54页
     ·MALDI-TOF-TOF 质谱数据分析第54-55页
     ·蛋白功能分析第55页
   ·结果第55-71页
     ·细胞形态的变化第55-58页
     ·四种不同类型细胞(GV、GR、OR、RC)的虾青素含量第58-59页
     ·四种细胞总可溶性蛋白含量的变化第59页
     ·四种不同类型细胞(GV、GR、OR、RC)的 77K 低温荧光光谱第59-60页
     ·四种不同类型细胞(GV、GR、OR、RC)叶绿素荧光差异第60-62页
     ·不同类型细胞总可溶蛋白 SDS-PAGE 结果第62页
     ·类囊体膜蛋白提取第62-63页
     ·类囊体膜色素组成的变化第63-64页
     ·三种细胞总可溶性蛋白 2D-DIGE 差异分析第64-66页
     ·连续密度梯度离心分析的类囊体膜条带差异变化第66-67页
     ·DM 增溶后膜蛋白 SDS-PAGE 解析的差异蛋白第67-69页
     ·2D BN-SDS-PAGE 解析的差异膜蛋白第69页
     ·类囊体膜差异蛋白鉴定和功能分析第69-71页
   ·讨论第71-78页
     ·虾青素的积累与细胞形态的变化第71-72页
     ·四种细胞在类囊体膜的光系统上存在光能吸收和利用的重新分配第72-73页
     ·虾青素合成过程中 OR 细胞与 RC 细胞对逆境的适应第73页
     ·GV 细胞具有潜在的较高的固碳能力和细胞分裂能力第73-74页
     ·氧化还原酶类在 GV 细胞中较高表达第74-75页
     ·RC 孢子休眠状态下调的蛋白表明细胞内代谢缓慢第75页
     ·虾青素积累的不同阶段,类囊体膜结构得到保持第75-76页
     ·细胞类囊体膜上出现的调控蛋白第76-77页
     ·虾青素酯合成所需要的碳源供给第77-78页
第三章 盐藻和雨生红球藻响应强光逆境时的类囊体膜蛋白组变化第78-106页
 引言第78-80页
   ·材料与方法第80-87页
     ·藻种培养和类囊体膜提取第80-81页
     ·叶绿素荧光测量第81页
     ·类囊体膜成分提取和纯化第81页
     ·类囊体膜蛋白提取第81页
     ·膜蛋白超滤除盐第81页
     ·膜蛋白定量第81页
     ·膜蛋白的溶解与溶液内酶切第81-82页
     ·溶液内蛋白酶解第82页
     ·LCMS 蛋白鉴定和蛋白相对定量第82-84页
     ·质谱数据处理第84-85页
     ·虾青素合成不同阶段细胞固碳的测定第85-87页
   ·结果第87-97页
     ·强光照对雨生红球藻和盐藻类囊体膜结构的影响第87-88页
     ·强光照逆境下,两种微藻细胞光合电子传递的变化第88-89页
     ·强光下类囊体膜蛋白种类和含量的变化第89-94页
     ·虾青素合成和积累过程中对碳源的固定和利用第94-97页
   ·讨论第97-106页
     ·雨生红球藻的类囊体膜在强光照下得到更好的保护第97-98页
     ·雨生红球藻相对于盐藻更快的适应了强光逆境第98-99页
     ·细胞色素 b6/f 复合体的下降可能有利于虾青素的合成第99-100页
     ·雨生红球藻强光响应与盐藻相比特殊之处第100-104页
     ·雨生红球藻虾青素合成以及对逆境响应全方位性第104-106页
第四章 强光下不积累类胡萝卜素的大型海藻(浒苔)类囊体膜蛋白对强光的响应第106-116页
 引言第106-107页
   ·材料与方法第107-108页
     ·藻种和培养第107页
     ·强光照处理和材料收集第107页
     ·类囊体膜提取第107页
     ·类囊体膜蛋白提取第107页
     ·膜蛋白除盐第107-108页
     ·蛋白定量、酶切和 LCMS 定性、定量分析第108页
     ·质谱数据处理第108页
   ·结果第108-113页
     ·强光照不同阶段,LHCI 主要蛋白的变化第108页
     ·强光照不同阶段,LHCII 主要蛋白的变化第108-109页
     ·强光照不同阶段,细胞色素 b6/f 复合体主要蛋白的变化第109页
     ·强光照不同阶段,PSI 主要蛋白的变化第109-111页
     ·强光照不同阶段,PSII 主要蛋白的变化第111-112页
     ·PSII-S 蛋白在强光照后的变化第112-113页
   ·讨论第113-116页
     ·两个捕光色素蛋白系统在强光下变化不一致第113-114页
     ·PSI 和 PSII 反应中心蛋白分阶段变化第114页
     ·PsbS 蛋白可能在浒苔中参与强光照响应第114-116页
结论第116-117页
参考文献第117-140页
论文的后续研究工作第140-141页
作者简历第141-142页
已发表或完成的论文目录第142页

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