| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-25页 |
| ·轮状病毒的历史 | 第13页 |
| ·轮状病毒的形态、结构和基因组 | 第13-15页 |
| ·轮状病毒的理化特性和培养特性 | 第15页 |
| ·轮状病毒的流行病学 | 第15-16页 |
| ·轮状病毒感染的临床症状和病理变化 | 第16页 |
| ·轮状病毒的诊断方法研究进展 | 第16-18页 |
| ·轮状病毒感染的免疫机制 | 第18-20页 |
| ·局部黏膜免疫保护机制 | 第18页 |
| ·体液免疫 | 第18-19页 |
| ·细胞免疫 | 第19-20页 |
| ·其他非免疫机制 | 第20页 |
| ·荧光定量RT-PCR原理与应用 | 第20-25页 |
| ·定量原理 | 第21页 |
| ·FQ-PCR反应方法的分类 | 第21-23页 |
| ·非特异性DNA结合染料法 | 第21-22页 |
| ·TaqMan探针 | 第22页 |
| ·分子信标 | 第22-23页 |
| ·杂交探针 | 第23页 |
| ·复合探针 | 第23页 |
| ·实时荧光定量PCR的应用 | 第23-25页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 3 材料与方法 | 第26-35页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·病毒、细胞及临床病料 | 第26页 |
| ·试验动物 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂和药品 | 第26-27页 |
| ·主要培养基的配置 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-35页 |
| ·引物与探针的设计 | 第27页 |
| ·病毒核酸的提取 | 第27-28页 |
| ·DNA病毒Total DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·RNA病毒Total RNA的提取 | 第28页 |
| ·cDNA的制备 | 第28页 |
| ·阳性标准质粒的制备 | 第28-30页 |
| ·引物的设计 | 第28页 |
| ·目的片段的扩增 | 第28-29页 |
| ·扩增产物的回收与纯化 | 第29页 |
| ·纯化产物与载体的连接 | 第29页 |
| ·感受态制备 | 第29页 |
| ·转化 | 第29-30页 |
| ·质粒的大量提取 | 第30页 |
| ·质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·实时定量RT-PCR反应体系的建立 | 第30-31页 |
| ·标准曲线的制备 | 第31页 |
| ·特异性试验 | 第31页 |
| ·敏感性试验 | 第31页 |
| ·重复性试验 | 第31页 |
| ·临床病例的检测 | 第31-32页 |
| ·PoRV细胞培养物的检测 | 第32页 |
| ·人工动物试验 | 第32页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR | 第32-33页 |
| ·试验动物组织中病毒RNA的提取 | 第32页 |
| ·荧光定量RT-PCR检测 | 第32-33页 |
| ·组织切片制备 | 第33页 |
| ·HE染色 | 第33-34页 |
| ·免疫组化法检测试验猪的病毒含量情况 | 第34-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-44页 |
| ·标准质粒的制备 | 第35页 |
| ·荧光定量RT-PCR反应体系的建立及标准曲线的制备 | 第35-37页 |
| ·特异性试验 | 第37页 |
| ·敏感性试验 | 第37-38页 |
| ·重复性试验 | 第38-39页 |
| ·临床病例的检测 | 第39页 |
| ·PoRV细胞培养物中病毒载量的检测 | 第39页 |
| ·人工动物试验 | 第39-40页 |
| ·荧光定量RT-PCR检测人工感染猪粪便排毒量 | 第40-41页 |
| ·病理学检测 | 第41-44页 |
| ·HE染色检测 | 第41-43页 |
| ·免疫组化法对病毒的检测 | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-47页 |
| ·荧光定量PCR技术讨论 | 第44页 |
| ·猪轮状病毒致病特性 | 第44-45页 |
| ·猪轮状病毒的排毒规律探讨 | 第45-46页 |
| ·试验中需要注意的问题 | 第46-47页 |
| 6 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55页 |