| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌的简介 | 第9页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌中乙醇代谢途径关键酶的研究 | 第9-10页 |
| ·醛/醇脱氢酶的研究 | 第10-12页 |
| ·醛/醇脱氢酶E的简介 | 第10-11页 |
| ·嗜热厌氧杆菌中醛/醇脱氢酶的研究进展 | 第11-12页 |
| ·醇脱氢酶 | 第12-15页 |
| ·醇脱氢酶的总介 | 第12-13页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌中醇脱氢酶B的研究进展 | 第13-14页 |
| ·醇脱氢酶A的简介 | 第14页 |
| ·嗜热厌氧乙醇杆菌中醇脱氢酶A的研究进展 | 第14-15页 |
| ·立题背景及本文研究内容 | 第15-17页 |
| ·立题背景 | 第15-16页 |
| ·本文研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 嗜热厌氧乙醇杆菌醇脱氢酶A克隆、表达及定性 | 第17-34页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·菌种与质粒 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·主要化学试剂及酶 | 第17-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-19页 |
| ·DNA引物合成和DNA测序服务 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-27页 |
| ·T.ethanolicus JW200基因组的提取及检测 | 第19-20页 |
| ·分子生物学基本操作 | 第20-22页 |
| ·醇脱氢酶A的基因克隆及表达 | 第22-24页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第24页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第24-25页 |
| ·NADPH和NADH的标准曲线 | 第25-26页 |
| ·醇脱氢酶A酶活测定方法 | 第26-27页 |
| ·醇脱氢酶A的酶学性质分析 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-32页 |
| ·目的片段adhA克隆 | 第27-28页 |
| ·表达质粒pHsh-adhA的构建 | 第28页 |
| ·醇脱氢酶A在E.coli DH10B中的表达及纯化 | 第28-29页 |
| ·醇脱氢酶A的酶学性质 | 第29-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 嗜热厌氧乙醇杆菌乙醇代谢途径中醇脱氢酶A的生理功能研究 | 第34-46页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·菌种与质粒 | 第34页 |
| ·培养基和培养基的配制 | 第34-36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-39页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·T.ethanolicus JW200基因组的提取及检测 | 第36-37页 |
| ·基因操作 | 第37页 |
| ·穿梭质粒pTE-ori-adhA和pTE-ori-adhE-adhA的构建 | 第37页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第37页 |
| ·NADPH和NADH的标准曲线 | 第37页 |
| ·醇脱氢酶A可逆反应的酶活测定 | 第37页 |
| ·嗜热厌氧杆菌胞内NADH和NAD~+的测定 | 第37-38页 |
| ·嗜热菌的超声波转化 | 第38-39页 |
| ·乙醇产量的测定 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-43页 |
| ·质粒pTE-ori-adhA和pTE-ori-adhE-adhA的构建 | 第39-41页 |
| ·醇脱氢酶A最适条件下的催化特性 | 第41页 |
| ·醇脱氢酶A生理条件下的催化特性 | 第41-43页 |
| ·重组质粒转化嗜热厌氧乙醇杆菌JW200后乙醇产量 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-46页 |
| 第四章 全文总结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
