| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| ·逆境胁迫的分类 | 第12页 |
| ·植物响应逆境胁迫的机制 | 第12-14页 |
| ·逆境胁迫下植物的渗透调节 | 第12-13页 |
| ·逆境胁迫下植物的氧化调节 | 第13页 |
| ·逆境胁迫下植物基因调控 | 第13-14页 |
| ·ABA生物合成途径及关键调控酶 | 第14-17页 |
| ·ABA的生物合成途径 | 第14-15页 |
| ·玉米黄质环氧化酶(ZEP) | 第15-16页 |
| ·9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED) | 第16页 |
| ·ABA醛氧化酶(AAO) | 第16-17页 |
| ·蛋白激酶SNRK的研究 | 第17-19页 |
| ·SnRK基因家族的分类 | 第17页 |
| ·植物中SnRK2亚族的研究 | 第17-19页 |
| ·本研究的目的意义和内容 | 第19-21页 |
| ·目的意义 | 第19页 |
| ·技术路线 | 第19-21页 |
| 2 甘蔗SONCED基因与SOSNRK2.1基因的克隆 | 第21-32页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·试验材料 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·菌种及克隆载体 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-27页 |
| ·甘蔗总RNA提取及检测 | 第22页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第22-23页 |
| ·SoNCED基因和SoSnRK2.1基因开放阅读框的PCR扩增 | 第23-25页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第25页 |
| ·目的片段与载体的连接反应 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-31页 |
| ·甘蔗总RNA的质量检测 | 第27-28页 |
| ·SoNCED基因和SoSnRK2.1基因开放阅读框的PCR扩增 | 第28页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第28-30页 |
| ·重组子的酶切验证 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 3 甘蔗SONCED基因与SOSNRK2.1基因的原核表达 | 第32-43页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·试验材料 | 第32页 |
| ·菌种和质粒 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-36页 |
| ·原核表达载体质粒及重组质粒的大量提取 | 第33页 |
| ·重组质粒及原核表达载体质粒的酶切及回收 | 第33页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第33-34页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第34页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序 | 第34页 |
| ·原核表达载体重组质粒的酶切验证 | 第34页 |
| ·重组质粒转入大肠杆菌BL21 | 第34页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·诱导蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第35页 |
| ·包涵体的确定 | 第35页 |
| ·诱导蛋白的纯化 | 第35页 |
| ·纯化蛋白的质谱鉴定 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-42页 |
| ·目的基因表达载体的构建与重组质粒的酶切验证 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第37-38页 |
| ·包涵体的确定 | 第38-39页 |
| ·蛋白纯化 | 第39-41页 |
| ·质谱鉴定 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 4 甘蔗SONCED基因与SOSNRK2.1基因的实时荧光定量 | 第43-49页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·材料处理 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·实时荧光定量PCR引物设计 | 第43-44页 |
| ·材料总RNA的提取及检测 | 第44页 |
| ·逆转录 | 第44-45页 |
| ·荧光定量PCR的检测 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-47页 |
| ·不同胁迫处理下甘蔗SoNCED基因的表达分析 | 第45-46页 |
| ·不同胁迫处理下甘蔗SoSnRK2.1基因的表达分析 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-49页 |
| 5 甘蔗SOSNRK2.1基因的真核表达载体的构建及其遗传转化 | 第49-61页 |
| ·材料 | 第49-51页 |
| ·试验材料 | 第49页 |
| ·菌种和质粒 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49-51页 |
| ·方法 | 第51-54页 |
| ·正反义植物表达载体的构建 | 第51-52页 |
| ·农杆菌介导法转化烟草 | 第52-53页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化与植物再生 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-60页 |
| ·目的基因表达载体的构建与重组质粒的酶切验证 | 第54-55页 |
| ·重组质粒向农杆菌的转化 | 第55-56页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第56-58页 |
| ·转基因烟草苗的PCR检测 | 第58-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 6 讨论与结论 | 第61-65页 |
| ·全文讨论 | 第61-63页 |
| ·全文结论 | 第63-64页 |
| ·论文创新点 | 第64页 |
| ·问题与展望 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 附录 | 第73-87页 |
