广西鸭圆环病毒遗传变异分析及Cap蛋白的原核表达
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-20页 |
| ·DuCV概述 | 第14页 |
| ·DuCV基因组结构 | 第14-15页 |
| ·DuCV流行情况 | 第15页 |
| ·致病机理 | 第15-16页 |
| ·诊断方法 | 第16-17页 |
| ·防控措施 | 第17页 |
| ·研究目的及意义 | 第17-18页 |
| ·研究目标 | 第18页 |
| ·研究方法及技术路线 | 第18-20页 |
| 第二章 广西鸭群中鸭圆环病毒的遗传变异分析 | 第20-44页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·组织样品 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-32页 |
| ·样品处理 | 第21页 |
| ·病毒DNA提取 | 第21-22页 |
| ·引物的设计与合成 | 第22页 |
| ·PCR检测 | 第22-23页 |
| ·PCR产物凝胶电泳 | 第23页 |
| ·PCR产物回收 | 第23-24页 |
| ·DNA片段连接 | 第24页 |
| ·连接产物的转化 | 第24页 |
| ·质粒提取 | 第24页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第24-26页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第25页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组质粒序列测定 | 第26页 |
| ·质粒序列分析 | 第26-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-42页 |
| ·PCR检测结果 | 第32页 |
| ·基因序列分析 | 第32-33页 |
| ·基因组序列分析 | 第33-42页 |
| ·全基因组序列的分型 | 第33-34页 |
| ·ORF C1(Cap基因)序列的基因分型 | 第34-35页 |
| ·ORF V1(Rep基因)序列的基因分型 | 第35页 |
| ·ORF C2序列的基因分型 | 第35-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 鸭圆环病毒Cap蛋白的原核表达 | 第44-62页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-51页 |
| ·目的基因密码子优化 | 第45页 |
| ·目的基因片段的回收 | 第45页 |
| ·目的片段与表达载体pET-32a的连接 | 第45-46页 |
| ·连接物产物的转化 | 第46页 |
| ·重组质粒pET-32a-Cap的提取 | 第46页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第46页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第47页 |
| ·Cap蛋白的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·阳性重组质粒pET-32a-Cap的转化 | 第48页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第48-49页 |
| ·最佳诱导表达时间的确定 | 第48-49页 |
| ·最佳表达IPTG浓度的确定 | 第49页 |
| ·最佳诱导表达温度的确定 | 第49页 |
| ·表达形式的检测 | 第49页 |
| ·Western blot鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| ·结果及分析 | 第51-59页 |
| ·重组质粒pET-32a-Cap鉴定结果 | 第51页 |
| ·Cap蛋白的诱导表达条件筛选结果 | 第51-59页 |
| ·阳性样品电泳结果 | 第51-53页 |
| ·最佳表达时间的确定 | 第53-54页 |
| ·最佳表达IPTG浓度的确定 | 第54-55页 |
| ·最佳诱导表达温度的确定 | 第55-56页 |
| ·表达形式的检测 | 第56-57页 |
| ·Western blot鉴定 | 第57-58页 |
| ·蛋白纯化结果 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| 第四章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录1 | 第68-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第83页 |
