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浙江红山茶花青素和脂肪酸合成相关基因克隆与表达分析

致谢第1-4页
摘要第4-6页
Abstract第6-14页
第一章 文献综述第14-32页
 1 浙江红山茶及其相关研究进展第14-16页
   ·浙江红山茶的生物学特性及利用第14页
   ·浙江红山茶的研究现状第14-15页
   ·油茶的分子生物学研究第15-16页
 2.测序技术的发展及在植物育种上的应用第16-21页
   ·测序技术的发展第16-18页
     ·第一代测序技术第16页
     ·第二代测序技术第16-18页
     ·第三代测序技术第18页
   ·测序技术在植物育种中的应用第18-21页
     ·基因组变异和分子标记辅助选择第18-19页
     ·天然群体关联作图第19页
     ·远缘杂交和基因渐渗第19-20页
     ·基因表达谱分析第20页
     ·群体遗传学和进化生物学第20页
     ·全基因组和细胞器基因组测序第20-21页
     ·表观遗传修饰第21页
 3. 植物类黄酮的生物合成及调控第21-27页
   ·类黄酮的生物合成第21-25页
   ·类黄酮合成的调控第25-27页
 4. 植物脂肪酸合成及其累积模式第27-31页
   ·植物脂肪酸的合成第27-29页
   ·脂肪酸碳链的去饱和第29-30页
   ·脂肪酸累积模式研究第30-31页
 5. 本研究的目的和意义第31-32页
第二章 浙江红山茶的转录组测序分析第32-45页
 1 引言第32页
 2 材料与方法第32-36页
   ·实验材料第32页
   ·实验试剂第32-33页
   ·实验仪器第33页
   ·实验方法第33-36页
     ·浙江红山茶总 RNA 提取第33-34页
     ·RNA 的纯化第34页
     ·RNA 质量检测第34页
     ·cDNA 的合成第34-35页
     ·cDNA 的纯化第35页
     ·转录组测序第35-36页
 3 结果与分析第36-43页
   ·浙江红山茶 RNA 的提取第36页
   ·cDNA 的合成与检测第36页
   ·序列的处理与拼接第36-37页
   ·功能注释和 GO 分类第37-39页
   ·代谢通路分析第39-41页
   ·转录因子预测第41-43页
 4 讨论第43-45页
第三章 浙江红山茶花青素合成相关基因的克隆及表达分析第45-76页
 1 引言第45页
 2 材料和方法第45-56页
   ·实验材料第45-46页
   ·实验试剂第46页
   ·实验仪器第46页
   ·实验方法第46-56页
     ·RNA 提取和纯化第46页
     ·cDNA 的合成第46-47页
     ·引物的设计第47-48页
     ·3'RACE 巢式 PCR第48-49页
       ·反转录反应第48页
       ·3'RACE Outer PCR第48-49页
       ·3'RACE Inner PCR第49页
     ·5'RACE 巢式 PCR第49-52页
       ·去磷酸化反应第49-50页
       ·去帽子反应第50页
       ·5'Adaptor 的连接第50-51页
       ·反转录反应第51页
       ·5'RACE Outer PCR第51-52页
       ·5'RACE Inner PCR第52页
     ·目的片段的回收和纯化第52-53页
     ·片段与载体的连接第53页
     ·感受态细胞的制备第53页
     ·连接产物的转化第53-54页
     ·阳性克隆的鉴定第54页
     ·序列分析第54页
     ·基因的表达分析第54-56页
       ·RNA 反转成 cDNA第54-55页
       ·实时定量 RT-PCR第55-56页
 3 结果与分析第56-74页
   ·浙江红山茶 PAL,CHI,F3H,DFR,ANS 和 UFGT 等基因的克隆第56-57页
   ·浙江红山茶 PAL,CHI,F3H,DFR,ANS,UFGT 等基因的生物信息学分析第57-72页
     ·苯丙氨酸解氨酶 PAL 基因的克隆与分析第57-59页
     ·查尔酮异构酶 CHI 基因的克隆与分析第59-60页
     ·黄烷酮羟化酶 F3H 基因的克隆与分析第60-63页
     ·二氢黄酮醇 4-还原酶 DFR 的克隆与分析第63-65页
     ·花青素合成酶 ANS 的克隆与分析第65-68页
     ·类黄酮糖基转移酶 UFGT 的克隆与分析第68-69页
     ·肉桂酸脱羧酶 C4H 的克隆与分析第69-72页
     ·查尔酮合酶 CHS 的克隆与分析第72页
   ·浙江红山茶花青素合成相关基因的表达分析第72-74页
     ·花青素合成相关基因在花发育阶段的表达分析第72-74页
     ·花青素合成相关基因的组织表达特性分析第74页
 4 讨论第74-76页
第四章 浙江红山茶脂肪酸合成相关基因的克隆及表达分析第76-96页
 1 引言第76-77页
 2 材料和方法第77-79页
   ·实验材料第77页
   ·实验试剂第77页
   ·仪器设备第77页
   ·实验方法第77-79页
     ·RNA 的提取第77-78页
     ·RNA 的纯化和检测第78页
     ·RACE 技术进行全长 cDNA 的克隆第78页
     ·cDNA 的合成第78页
     ·实时定量 PCR第78页
     ·生物信息学分析第78-79页
 3 结果与分析第79-94页
   ·浙江红山茶脂肪酸合成途径相关基因的克隆和序列分析第79-90页
     ·乙酰-CoA 羧化酶 ACC 的克隆与分析第79-82页
     ·酰基载体蛋白 ACP 基因的克隆与分析第82页
     ·乙酰-CoA:ACP 转酰酶 ACAT 的克隆与分析第82-83页
     ·β-酮脂酰 ACP 合酶 KAS 的克隆与分析第83-84页
     ·β-酮脂酰 ACP 还原酶 KR 的克隆与分析第84-85页
     ·β-羟脂酰-ACP 脱水酶 HD 的克隆与分析第85-86页
     ·烯脂酰-ACP 还原酶 ER 的克隆与分析第86-87页
     ·脂酰-脂去饱和酶的克隆与分析第87-88页
     ·脂酰-ACP 去饱和酶的克隆与分析第88-89页
     ·β-酮脂酰-CoA 合酶 KCS 的克隆与分析第89-90页
   ·浙江红山茶脂肪酸合成途径相关基因的表达分析第90-94页
     ·BC 和 BCCP 在种子发育过程中的表达分析第90页
     ·ACP 在种子发育过程中的表达分析第90-91页
     ·ACAT 在种子发育过程中的表达分析第91页
     ·KAS 在种子发育过程中的表达分析第91-92页
     ·KR 在种子发育过程中的表达分析第92页
     ·HD 在种子发育过程中的表达分析第92-93页
     ·ER 在种子发育过程中的表达分析第93页
     ·KCS 在种子发育过程中的表达分析第93-94页
     ·SAD 和 FAD2 在种子发育过程中的表达分析第94页
 4 讨论第94-96页
第五章 浙江红山茶种子发育过程中的脂肪酸累积模式研究第96-101页
 1 引言第96页
 2 材料与方法第96-97页
   ·实验材料第96页
   ·实验试剂第96页
   ·实验仪器第96页
   ·实验方法第96-97页
   ·数据分析第97页
 3 结果与分析第97-100页
   ·种子发育过程中脂肪酸总量的变化第97页
   ·种子发育过程中脂肪酸相对含量的变化第97-98页
   ·种子发育过程中脂肪酸绝对量的变化第98-99页
   ·种子发育全程中脂肪酸的相关分析和主成份分析第99-100页
 4 讨论第100-101页
第六章 主要结论和展望第101-104页
 一、本研究的主要结论第101-102页
 二 主要创新点第102-103页
 三 存在的问题及展望第103-104页
参考文献第104-113页

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