| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-21页 |
| ·手性化合物与手性药物 | 第9-11页 |
| ·(-)γ-内酰胺及其应用 | 第11-12页 |
| ·手性化合物的制备 | 第12-17页 |
| ·外消旋体拆分法 | 第13-15页 |
| ·不对称合成法 | 第15-16页 |
| ·生物法手性拆分特点 | 第16-17页 |
| ·固定化酶技术 | 第17-18页 |
| ·本课题研究内容及意义 | 第18-21页 |
| 第二章 内酰胺酶的固定化及酶学性质研究 | 第21-35页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·材料与方法 | 第21-27页 |
| ·主要试剂及药品 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·质粒及菌种 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·溶剂配制 | 第22-23页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第24页 |
| ·BCA法测蛋白浓度 | 第24-25页 |
| ·手性HPLC分析产品 | 第25页 |
| ·酶的固定化 | 第25页 |
| ·固定化酶与游离酶米氏常数Km值以及Vmax | 第25-26页 |
| ·固定化酶与游离酶的最适温度测定 | 第26页 |
| ·固定化酶与游离酶的最适PH测定 | 第26页 |
| ·固定化酶与游离酶的PH耐受性测定 | 第26页 |
| ·固定化酶与游离酶在80℃的热耐受性测定 | 第26-27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-33页 |
| ·BCA法测蛋白浓度 | 第27页 |
| ·γ-内酰胺酶的表达与纯化 | 第27-28页 |
| ·固定化酶的制备 | 第28页 |
| ·固定化酶活性的测定 | 第28-29页 |
| ·固定化酶与游离酶Km | 第29-30页 |
| ·固定化酶与游离酶最适温度 | 第30-31页 |
| ·固定化酶与游离酶最适P H | 第31-32页 |
| ·固定化酶与游离酶pH耐受性 | 第32-33页 |
| ·温度耐受性 | 第33页 |
| ·本章小结 | 第33-35页 |
| 第三章 固定化酶柱上拆分(±)γ-内酰胺 | 第35-49页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·材料与方法 | 第35-40页 |
| ·主要试剂及药品 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·质粒及菌种 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·溶剂配制 | 第36-37页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第38-39页 |
| ·BCA法测蛋白浓度 | 第39页 |
| ·手性HPLC分析产品 | 第39页 |
| ·一步纯化固定化重组γ-内酰胺水解酶于Ni-螯合柱 | 第39页 |
| ·柱上拆分(±)γ-内酰胺制备(-)γ-内酰胺 | 第39-40页 |
| ·固定化酶柱的重复使用 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-46页 |
| ·柱上固定化酶 | 第40-44页 |
| ·固定化酶柱稳定性 | 第44-46页 |
| ·本章小结 | 第46-49页 |
| 第四章 乳糖诱导工程菌发酵产γ-内酰胺水解酶及中试放大 | 第49-61页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-53页 |
| ·主要试剂及药品 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| ·质粒及菌种 | 第50页 |
| ·湿菌体制备 | 第50-51页 |
| ·生物量(Biomass)的测定 | 第51页 |
| ·溶剂配制 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第51-52页 |
| ·手性HPLC分析产品 | 第52页 |
| ·乳糖与IPTG诱导的蛋白表达 | 第52-53页 |
| ·乳糖诱导的发酵中试放大 | 第53页 |
| ·结论与讨论 | 第53-58页 |
| ·乳糖与IPTG诱导蛋白表达量的比较 | 第53页 |
| ·乳糖诱导不同时间蛋白表达量 | 第53-54页 |
| ·不同乳糖浓度诱导蛋白表达量 | 第54-55页 |
| ·在培养基中直接加入乳糖蛋白表达 | 第55-56页 |
| ·放大试验 | 第56-58页 |
| ·本章小结 | 第58-61页 |
| 第五章 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第77-79页 |
| 作者及导师简介 | 第79-80页 |
| 北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第80-81页 |