| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 1 综述与导言 | 第9-21页 |
| ·海藻酸的简介 | 第9-11页 |
| ·海藻酸的结构组成 | 第9-10页 |
| ·海藻酸的理化性质 | 第10页 |
| ·海藻酸的应用及市场 | 第10-11页 |
| ·海藻酸裂解酶的研究进展 | 第11-20页 |
| ·海藻酸裂解酶的简介 | 第11-12页 |
| ·海藻酸裂解酶的分类和作用机制 | 第12-13页 |
| ·海藻酸裂解酶的活力检测 | 第13-14页 |
| ·海藻酸裂解酶的生物学功能 | 第14-15页 |
| ·海藻酸裂解酶的结构与功能分析 | 第15-18页 |
| ·海藻酸裂解酶的研究意义 | 第18-19页 |
| ·海藻酸裂解酶的基因工程研究进展 | 第19-20页 |
| ·课题研究背景及工作目标 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-38页 |
| ·材料和仪器 | 第21-26页 |
| ·化学药品&生物试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22-26页 |
| ·微生物学方法 | 第26-27页 |
| ·微生物培养条件 | 第26-27页 |
| ·菌种的保藏与活化 | 第27页 |
| ·遗传学方法 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受肽细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第28页 |
| ·分子生物学方法 | 第28-34页 |
| ·大肠杆菌中质粒DNA的抽提 | 第28-30页 |
| ·DNA的酶切 | 第30页 |
| ·DNA的连接 | 第30页 |
| ·DNA的沉淀 | 第30-31页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶回收 | 第31页 |
| ·细菌基因组DNA的制备方法 | 第31-32页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-34页 |
| ·带组氨酸标签蛋白的纯化 | 第34页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第34-35页 |
| ·试剂的配制 | 第35页 |
| ·操作步骤 | 第35页 |
| ·海藻酸裂解酶活性测定方法 | 第35-36页 |
| ·海藻酸酶定性测活方法 | 第35页 |
| ·海藻酸酶定量测活方法 | 第35-36页 |
| ·酶解产物的纯化方法 | 第36页 |
| ·实验中用到的计算机软件 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-62页 |
| ·Vibrio alginolyticus ATCC 17749中海藻酸裂解酶基因的克隆和鉴定 | 第38-45页 |
| ·Vibrio alginolyticus ATCC 17749基因组DNA的抽提和菌种的鉴定 | 第38-39页 |
| ·海藻酸裂解酶基因片段的克隆和鉴定 | 第39-41页 |
| ·可能的海藻酸裂解酶基因的克隆 | 第41-45页 |
| ·T7启动子介导下的基因表达 | 第45-54页 |
| ·algV1,algV2基因表达质粒的构建 | 第45-47页 |
| ·algV3基因表达质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·algV4基因表达质粒的构建 | 第48-50页 |
| ·algV5基因表达质粒的构建 | 第50-51页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳检测基因的表达 | 第51-54页 |
| ·重组蛋白的酶活分析 | 第54-56页 |
| ·重组蛋白的海藻酸裂解酶活性的定性测定 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白的海藻酸裂解酶活性的定量测定 | 第55-56页 |
| ·ALGV2的纯化与酶学性质的探查 | 第56-62页 |
| ·ALGV2海藻酸裂解酶对海藻酸钠的降解曲线 | 第56页 |
| ·ALGV2重组蛋白的纯化 | 第56-58页 |
| ·ALGV2海藻酸裂解酶酶解产物的质谱分析 | 第58-59页 |
| ·ALGV2海藻酸裂解酶酶学性质的研究 | 第59-62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| ·V.alginolyticus ATCC 17749中海藻酸裂解酶基因多样性的分析 | 第62-64页 |
| ·V.alginolyticus 40B中海藻酸酶基因的Blastp比对结果与讨论 | 第64-66页 |
| 结论与展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
