| 中文摘要 | 第1-14页 |
| 第一章 拟南芥盐敏感突变体的筛选鉴定 | 第10-11页 |
| 第二章 蛋白酶体 5 亚基与植物抗氧化性的相关性研究 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| Chapter 1: Isolation and Genetic Analysis of Arabidopsis Salt-Sensitive-Mutants | 第14-15页 |
| Chapter 2: The Proteasome 5 Subunit Relate to Plant Oxidative Stress Tolerance | 第15-18页 |
| 缩略词 | 第18-20页 |
| 第一部分 文献综述 | 第20-44页 |
| 1 盐胁迫对植物的伤害及耐盐机制 | 第20-25页 |
| ·盐胁迫对植物的伤害 | 第20-22页 |
| ·渗透胁迫 | 第20-21页 |
| ·离子毒害及营养失衡 | 第21页 |
| ·氧化胁迫及代谢紊乱 | 第21-22页 |
| ·盐胁迫下植物的耐盐机制 | 第22-25页 |
| ·盐胁迫的应答反应 | 第22-23页 |
| ·渗透调节机制 | 第23页 |
| ·植物细胞的离子均衡 | 第23-24页 |
| ·对活性氧及氧化代谢产物的清除 | 第24-25页 |
| 2 植物对氧化胁迫的应答及对氧化胁迫产物的清除 | 第25-27页 |
| ·植物对氧化胁迫的应答 | 第25页 |
| ·盐胁迫下植物活性氧的清除 | 第25-26页 |
| ·非酶促抗氧化系统 | 第25页 |
| ·酶促抗氧化系统 | 第25-26页 |
| ·抗氧化酶类与植物胁迫耐受性 | 第26页 |
| ·植物对蛋白氧化胁迫产物的清除 | 第26-27页 |
| ·自体吞噬空泡对氧化蛋白的清除 | 第27页 |
| ·蛋白酶体对氧化蛋白的清除 | 第27页 |
| 3 拟南芥盐敏感突变体的研究进展 | 第27-33页 |
| ·突变体库技术以及对研究基因功能的作用 | 第28-30页 |
| ·突变体库的筛选对研究基因功能的作用 | 第28页 |
| ·突变体库的种类和特点 | 第28-30页 |
| ·SOS 途径相关突变体的研究进展 | 第30-32页 |
| ·SOS 途径突变体的研究进展 | 第30-31页 |
| ·SOS 途径突变体对揭示盐胁迫调节机制的作用 | 第31-32页 |
| ·SOS 途径突变体揭示了氧化胁迫途径与盐胁迫途径的交叉关系 | 第32页 |
| ·其他盐敏感突变体的研究进展 | 第32-33页 |
| 4 蛋白酶体研究进展 | 第33-42页 |
| ·26S 蛋白酶体的结构及亚基的功能 | 第34-37页 |
| ·核心颗粒的结构 | 第34-35页 |
| ·核心蛋白酶体的酶活性 | 第35页 |
| ·调节亚基的组成 | 第35页 |
| ·调节亚基的功能 | 第35-36页 |
| ·蛋白酶体的多样性 | 第36-37页 |
| ·蛋白酶体抑制剂 | 第37页 |
| ·泛素化蛋白的降解途径 | 第37-39页 |
| ·泛素及启动酶系统 | 第37-38页 |
| ·依赖泛素化的蛋白降解过程 | 第38-39页 |
| ·不依赖泛素的降解途径 | 第39-40页 |
| ·20S蛋白酶体对氧化蛋白质的降解 | 第39页 |
| ·重度氧化蛋白对蛋白酶体活性的抑制 | 第39-40页 |
| ·20S 蛋白酶体的组装 | 第40-42页 |
| ·20S 蛋白酶体的组装过程 | 第40页 |
| ·亚基间的相互调节机制 | 第40-41页 |
| ·5 亚基对蛋白酶体组装的促进作用 | 第41页 |
| ·对潜在的促组装作用因子的分离 | 第41-42页 |
| ·蛋白酶体的细胞定位 | 第42页 |
| 5 本实验的意义 | 第42-44页 |
| ·筛选拟南芥盐敏感突变体的意义 | 第42-43页 |
| ·研究蛋白酶体 5 亚基与抗氧化胁迫相关性实验的意义 | 第43-44页 |
| 第二部分 实验研究 | 第44-107页 |
| 第一章 拟南芥盐敏感突变体的筛选与鉴定 | 第44-83页 |
| 一 实验材料和仪器 | 第44-47页 |
| 1 植物材料与培养条件 | 第44-45页 |
| 2 菌种及质粒 | 第45页 |
| 3 酶及化学试剂 | 第45页 |
| 4 主要仪器设备 | 第45-46页 |
| 5 培养基、常用生化及分子生物学试剂 | 第46页 |
| ·拟南芥生长培养基 | 第46页 |
| ·常用生化及分子生物学试剂 | 第46页 |
| 6 引物序列 | 第46-47页 |
| 7 分析软件 | 第47页 |
| 二 实验方法 | 第47-57页 |
| 1 基本分子生物学实验技术 | 第47-51页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第47页 |
| ·大肠杆菌感受态的转化 | 第47-48页 |
| ·质粒的提取 | 第48页 |
| ·质粒的酶切和连接 | 第48-49页 |
| ·质粒的酶切 | 第48页 |
| ·酶切片段的回收 | 第48-49页 |
| ·酶切片段的连接 | 第49页 |
| ·菌种的保藏 | 第49页 |
| ·PCR | 第49页 |
| ·植物基因组 DNA 提取 | 第49-51页 |
| ·植物基因组 DNA 的小量提取 | 第49-50页 |
| ·CTAB 法大量提取植物基因组 DNA | 第50-51页 |
| 2 筛选盐敏感突变体的实验方法 | 第51-53页 |
| ·拟南芥盐敏感突变体的筛选 | 第51-52页 |
| ·拟南芥盐敏感突变体筛选压力及筛选指标的确立 | 第51页 |
| ·拟南芥盐敏感突变体的筛选方法 | 第51-52页 |
| ·拟南芥盐敏感突变体的回交试验及遗传分析 | 第52-53页 |
| ·回交试验的目的及技术路线 | 第52-53页 |
| ·杂交方法 | 第53页 |
| ·回交检测方法及遗传分析 | 第53页 |
| 3 突变体基因定位及遗传分析 | 第53-55页 |
| ·突变体 T-DNA 插入位点的鉴定 | 第53-54页 |
| ·质粒拯救法 | 第53-54页 |
| ·检测突变表型与 T-DNA 插入的相关性 | 第54页 |
| ·PCR 鉴定回交后代的 T-DNA 插入情况 | 第54页 |
| ·图位克隆 | 第54-55页 |
| ·作图群体的构建 | 第54-55页 |
| ·突变基因的染色体初步定位 | 第55页 |
| ·重测序技术和 SSLP 标记的开发 | 第55页 |
| 4 植物生理学与生物化学类实验方法 | 第55-57页 |
| ·胁迫条件种子萌发率测定 | 第55-56页 |
| ·培养基模拟胁迫处理方法 | 第56页 |
| ·培养介质中胁迫处理 | 第56页 |
| ·Na+、K+离子含量的测定方法 | 第56页 |
| ·根扫描电镜样品的制备和观察 | 第56页 |
| ·叶片大小及表皮细胞大小的测量 | 第56-57页 |
| ·指甲油印迹法的改进 | 第56页 |
| ·叶片面积测量 | 第56-57页 |
| ·叶片下表皮细胞面积的测定 | 第57页 |
| 三 实验结果与分析 | 第57-79页 |
| 1 激活标签突变体库耐盐突变体及其他突变体的筛选 | 第57页 |
| ·耐盐突变体的筛选结果 | 第57页 |
| ·植株矮小突变体的筛选结果 | 第57页 |
| 2 拟南芥盐敏感突变体的筛选结果 | 第57-59页 |
| ·拟南芥盐敏感突变体筛选压力及筛选指标的确立 | 第57-58页 |
| ·拟南芥盐敏感突变体的筛选结果 | 第58页 |
| ·突变体的显/隐性鉴定及遗传分析 | 第58-59页 |
| 3 dds1 突变位点的鉴定 | 第59-66页 |
| ·质粒拯救法获得 T-DNA 插入的基因组旁邻序列及相关性分析 | 第59-63页 |
| ·通过质粒拯救法获得 T-DNA 插入的基因组旁邻序列 | 第59-61页 |
| ·PCR 检测突变表型与 T-DNA 插入的相关性 | 第61-62页 |
| ·PCR 验证突变表型与 T-DNA 插入的相关性 | 第62-63页 |
| ·突变位点的图位克隆 | 第63-65页 |
| ·作图群体的构建及突变基因连锁分子标记的确定 | 第63-64页 |
| ·突变基因的初步定位 | 第64-65页 |
| ·dds1 全基因组重测序及分子标记开发 | 第65-66页 |
| ·dds1 全基因组重测序 | 第65页 |
| ·dds1 全基因组重测序结果分析 | 第65-66页 |
| ·突变基因的进一步染色体初步定位 | 第66页 |
| 4 dds1 在正常生长条件下的生长表型分析 | 第66-70页 |
| ·dds1 在正常生长条件下叶片的生长表型分析 | 第66-68页 |
| ·dds1 叶下表皮细胞大小与野生型的差异 | 第68-69页 |
| ·dds1 在正常生长条件下根的生长表型分析 | 第69页 |
| ·IAA、KT 对 dds1 突变体根伸长的影响 | 第69页 |
| ·dds1 中 PIN3::GFP 报告基因表达情况 | 第69-70页 |
| 5 dds1 的盐敏感表型分析 | 第70-74页 |
| ·dds1 在盐胁迫条件下的种子萌发和生长情况 | 第70-71页 |
| ·dds1 在盐胁迫条件下的种子萌发情况 | 第70页 |
| ·盐胁迫对 dds1 根伸长的影响 | 第70-71页 |
| ·150 mM NaCl 胁迫对 dds1 突变体根尖发育的影响 | 第71-72页 |
| ·盐处理下 pCycB1;1::GUS 在 dds1 中的表达变化 | 第72页 |
| ·盐胁迫对 dds1 叶片及叶表皮细胞大小的影响 | 第72-74页 |
| ·盐胁迫对 dds1 叶片大小的影响 | 第72-73页 |
| ·盐胁迫对 dds1 叶表皮细胞大小的影响 | 第73-74页 |
| 6 dds1 与 sos1 的对比 | 第74-76页 |
| ·dds1 与 sos1 对不同阳离子胁迫表型差异 | 第74-75页 |
| ·盐胁迫对 dds1 植株中 Na+、K+离子含量变化的影响 | 第75页 |
| ·dds1 与 sos1 的双杂交突变体的表型分析 | 第75-76页 |
| 7 其他胁迫因素对 dds1 生长的影响 | 第76-79页 |
| ·甘露醇处理下 dds1 的种子萌发情况和根生长情况 | 第76-77页 |
| ·甘露醇处理下 dds1 的种子萌发情况 | 第76页 |
| ·dds1 在含甘露醇培养基上根的生长情况 | 第76-77页 |
| ·dds1 在氧化胁迫培养基上的生长情况 | 第77-78页 |
| ·dds1 在含甲基紫精培养基上的萌发情况 | 第77页 |
| ·dds1 在含 H2O2培养基上根的生长情况 | 第77-78页 |
| ·dds1 在含 ABA 培养基上的生长情况 | 第78-79页 |
| 四 讨论 | 第79-83页 |
| 第二章 蛋白酶体 5 亚基与植物抗氧化性的相关性研究 | 第83-107页 |
| 一 实验材料和仪器 | 第83-85页 |
| 1 植物材料与培养条件 | 第83页 |
| 2 菌种及质粒 | 第83页 |
| 3 酶及化学试剂 | 第83页 |
| 4 主要仪器设备 | 第83页 |
| 5 培养基、常用生化及分子生物学试剂 | 第83页 |
| ·拟南芥生长培养基 | 第83页 |
| ·常用生化及分子生物学试剂 | 第83页 |
| 6 引物序列 | 第83-85页 |
| 7 分析软件 | 第85页 |
| 二 实验方法 | 第85-89页 |
| 1 基本分子生物学实验技术 | 第85-87页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第85页 |
| ·大肠杆菌感受态的转化 | 第85页 |
| ·质粒的提取 | 第85页 |
| ·质粒的酶切和连接 | 第85页 |
| ·质粒的酶切 | 第85页 |
| ·酶切片段的回收 | 第85页 |
| ·酶切片段的连接 | 第85页 |
| ·菌种的保藏 | 第85页 |
| ·PCR | 第85页 |
| ·植物基因组 DNA 的小量提取 | 第85页 |
| ·Trizol 法提取植物总 RNA | 第85-86页 |
| ·RNA 反转录反应 | 第86-87页 |
| ·实时定量 PCR | 第87页 |
| 2 植物表达载体的农杆菌转化、农杆菌质粒的提取与鉴定 | 第87-88页 |
| 3 渗透法转化拟南芥 | 第88页 |
| ·拟南芥的生长 | 第88页 |
| ·菌液的准备 | 第88页 |
| ·渗透转化 | 第88页 |
| 4 转基因植株的筛选及遗传分析 | 第88-89页 |
| ·拟南芥转基因植株的筛选及遗传分析 | 第88页 |
| ·转基因植株的遗传分析 | 第88-89页 |
| 5 胁迫处理实验方法 | 第89页 |
| ·胁迫条件下种子萌发率测定 | 第89页 |
| ·培养基模拟胁迫处理方法 | 第89页 |
| ·培养介质中胁迫处理 | 第89页 |
| 三 实验结果与分析 | 第89-104页 |
| 1 蛋白酶体 5 亚基蛋白序列分析及基因的克隆 | 第89-93页 |
| ·AtPBE 蛋白 Clustalx 分析 | 第89-91页 |
| ·AtPBE 蛋白系统谱系分析 | 第91-92页 |
| ·AtPBE2 基因的克隆 | 第92-93页 |
| 2 植物表达载体的构建以及酶切验证 | 第93-94页 |
| ·AtPBE2 基因过量表达载体的构建及酶切验证 | 第93-94页 |
| ·AtPBE2 基因 GFP 定位载体的构建及酶切验证 | 第94页 |
| 3 植物表达载体的农杆菌转化及 PCR 验证 | 第94-95页 |
| 4 拟南芥的遗传转化与筛选 | 第95页 |
| 5 转基因拟南芥植株的分子鉴定 | 第95-100页 |
| ·转基因拟南芥植株的 PCR 鉴定 | 第95-97页 |
| ·过量表达 AtPBE2 拟南芥植株的 PCR 鉴定 | 第95-96页 |
| ·AtPBE2-GFP 融合表达拟南芥植株的 PCR 鉴定 | 第96-97页 |
| ·过量表达株系的基因表达水平鉴定 | 第97-100页 |
| ·拟南芥总 RNA 的提取 | 第97页 |
| ·AtPBE2 过量表达株系的 RT-PCR 鉴定 | 第97-98页 |
| ·AtPBE2 过量表达株系的 Real-Time PCR 鉴定 | 第98-100页 |
| 6 SALK T-DNA 插入突变体的获得 | 第100-102页 |
| ·AtPBE 突变体的分子鉴定 | 第100页 |
| ·AtPBE 突变体基因表达量鉴定 | 第100-101页 |
| ·双突变体的构建 | 第101-102页 |
| 7 Real-Time PCR鉴定过量表达和突变体株系中蛋白酶体其他亚基表达量的变化 | 第102-103页 |
| 8 AtPBE2-GFP 融合蛋白的定位分析 | 第103页 |
| 9 AtPBE 过量表达和突变体拟南芥的表型分析 | 第103-104页 |
| ·AtPBE 过量表达和突变体拟南芥在正常生长条件下的生长情况 | 第103页 |
| ·MG132 处理对 AtPBE 过量表达株系种子萌发的影响 | 第103-104页 |
| ·AtPBE 过量表达和突变体拟南芥在不同胁迫条件下的生长情况 | 第104页 |
| ·AtPBE 过量表达和突变体拟南芥成苗期的胁迫处理情况 | 第104页 |
| 四 讨论 | 第104-107页 |
| 图版 | 第107-116页 |
| 附录 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-128页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
