| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 符号说明（Abbreviations） | 第13-17页 |
| 第一篇 阿维菌素ABC转运蛋白AvtAB及细胞色素P450 单加氧酶AveE的功能研究 | 第17-117页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-30页 |
| ·阿维菌素生物合成的研究进展 | 第17-22页 |
| ·阿维菌素的化学结构及应用 | 第17-18页 |
| ·阿维菌素生物合成相关基因的功能分析 | 第18-20页 |
| ·AveE的功能及呋喃环形成机制推测 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和内容 | 第21-22页 |
| ·放线菌中ABC转运蛋白的研究进展 | 第22-30页 |
| ·ABC转运蛋白的分类及结构 | 第23-24页 |
| ·ABC转运蛋白的作用机制 | 第24-26页 |
| ·放线菌中ABC内运蛋白的研究进展 | 第26-27页 |
| ·放线菌中ABC外排蛋白与次级代谢产物的跨膜转运 | 第27-29页 |
| ·本研究的目的和内容 | 第29-30页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第30-54页 |
| ·实验材料 | 第30-41页 |
| ·菌株 | 第30-31页 |
| ·质粒 | 第31-34页 |
| ·引物 | 第34-36页 |
| ·培养基和化学试剂 | 第36-41页 |
| ·实验方法 | 第41-54页 |
| ·大肠杆菌的培养和保存 | 第41页 |
| ·链霉菌的培养和保存 | 第41页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的少量快速提取及检测（快检） | 第42页 |
| ·链霉菌总DNA的少量快速提取 | 第42页 |
| ·链霉菌质粒的提取 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌化学转化（氯化钙法）感受态的制备和转化 | 第43页 |
| ·高压电穿孔法感受态的制备和转化 | 第43-44页 |
| ·DNA片段的回收（Omega公司试剂盒） | 第44页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第44-45页 |
| ·两亲本介导的质粒DNA在大肠杆菌与链霉菌之间的跨属接合转移 | 第45页 |
| ·基因中断菌株的筛选和验证 | 第45-46页 |
| ·链霉菌总RNA的提取 | 第46-47页 |
| ·阿维链霉菌的发酵培养 | 第47页 |
| ·发酵产物的提取 | 第47-48页 |
| ·高效液相色谱法检测发酵产物 | 第48页 |
| ·HPLC法测定阿维菌素B1a标准曲线 | 第48页 |
| ·YMG液体发酵分离并定量胞内胞外阿维菌素 | 第48-49页 |
| ·化合物（AveE底物）的分离及结构鉴定 | 第49-50页 |
| ·突变株发酵喂养实验 | 第50页 |
| ·AveE在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第50-51页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第52页 |
| ·AveE酶促反应体系及检测条件 | 第52-53页 |
| ·CDA生物活性测定 | 第53页 |
| ·生物信息学分析 | 第53-54页 |
| 第三章 阿维菌素生物合成基因簇上游ABC药物转运蛋白基因avtAB的功能研究 | 第54-80页 |
| ·前言 | 第54-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-76页 |
| ·avtAB基因置换突变株QJF8、QJF9 的构建 | 第56-68页 |
| ·avtAB基因超量表达突变株 8165/pJTU3470 的构建 | 第68-71页 |
| ·8165/pJTU3470 中阿维菌素结构基因、调控基因和avtAB转录水平检测 | 第71-76页 |
| ·小结与讨论 | 第76-80页 |
| 第四章 阿维菌素工业高产菌株的构建 | 第80-88页 |
| ·前言 | 第80-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-86页 |
| ·阿维菌素B1a工业高产菌株 3-115/pJTU3470 的构建 | 第81-84页 |
| ·工业菌株阿维菌素胞内胞外产量变化分析 | 第84-86页 |
| ·小结与讨论 | 第86-88页 |
| 第五章 AvtAB的底物专一性 | 第88-95页 |
| ·前言 | 第88-91页 |
| ·结果与分析 | 第91-94页 |
| ·AvtAB对寡霉素外排的影响 | 第91页 |
| ·AvtAB对CDA外排的影响 | 第91-94页 |
| ·小结与讨论 | 第94-95页 |
| 第六章 阿维菌素生物合成基因簇中细胞色素P450 单加氧酶基因aveE的功能研究 | 第95-117页 |
| ·前言 | 第95-97页 |
| ·结果与分析 | 第97-114页 |
| ·aveE基因缺失突变株的构建 | 第97-104页 |
| ·aveE回补突变株和meiE异源回补突变株的构建 | 第104-111页 |
| ·AveE体外活性检测 | 第111-114页 |
| ·小结与讨论 | 第114-117页 |
| 第二篇 安丝菌素双键异构现象的研究 | 第117-176页 |
| 第七章 文献综述 | 第117-123页 |
| ·安丝菌素的生物合成 | 第117-118页 |
| ·I型聚酮合酶的催化机制 | 第118-120页 |
| ·DH结构域与双键异构现象 | 第120-122页 |
| ·本研究的目的和内容 | 第122-123页 |
| 第八章 实验材料与方法 | 第123-135页 |
| ·实验材料 | 第123-130页 |
| ·菌株 | 第123-124页 |
| ·质粒 | 第124-128页 |
| ·引物 | 第128-129页 |
| ·培养基和化学试剂 | 第129-130页 |
| ·实验方法 | 第130-135页 |
| ·染色体定点突变的构建 | 第130-131页 |
| ·珍贵束丝放线菌的发酵及其产物的LC-MS检测 | 第131-132页 |
| ·安丝菌素模块二蛋白表达纯化 | 第132页 |
| ·甲基氢肉桂酸半胱胺硫脂的合成及核磁鉴定 | 第132-133页 |
| ·安丝菌素模块二与甲基氢肉桂酸半胱胺硫脂的体外反应 | 第133-135页 |
| 第九章 安丝菌素双键异构现象的研究 | 第135-173页 |
| ·前言 | 第135-136页 |
| ·结果与分析 | 第136-170页 |
| ·安丝菌素模块 2 模块 3 DH结构域的定点突变 | 第136-145页 |
| ·安丝菌素模块 2 后加载红霉素TE突变株的构建 | 第145-151页 |
| ·安丝菌素模块 2 体外表达及与模拟底物的共反应 | 第151-170页 |
| ·小结与讨论 | 第170-173页 |
| 第十章 总结与展望 | 第173-176页 |
| ·阿维菌素ABC转运蛋白AvtAB及细胞色素P450 单加氧酶AveE功能研究的总结与展望 | 第173-174页 |
| ·安丝菌素双键异构现象研究的总结与展望 | 第174-176页 |
| 参考文献 | 第176-183页 |
| 致谢 | 第183-185页 |
| 学术论文和科研成果 | 第185-187页 |
