| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第1章 前言 | 第13-27页 |
| ·微生物一氧化氮合酶的发现和进化史生物 | 第13-14页 |
| ·微生物一氧化氮合酶的结构和酶学分析 | 第14-15页 |
| ·微生物一氧化氮合酶的还原伙伴 | 第15-16页 |
| ·一氧化氮合酶在微生物中的生物功能 | 第16-18页 |
| ·链霉菌的简介 | 第18-20页 |
| ·链霉菌的形态分化 | 第20-21页 |
| ·天蓝色链霉菌的形态分化 | 第20-21页 |
| ·阿维链霉菌的形态分化 | 第21页 |
| ·链霉菌的次生代谢 | 第21-23页 |
| ·天蓝色链霉菌的次生代谢 | 第22页 |
| ·阿维链霉菌的次生代谢 | 第22-23页 |
| ·本文研究目的、研究内容和实验流程 | 第23-27页 |
| ·研究目的 | 第23页 |
| ·研究内容 | 第23-25页 |
| ·实验流程 | 第25-27页 |
| 第2章 阿维链霉菌一氧化氮合酶的基因克隆及生物信息学分析 | 第27-53页 |
| ·实验材料 | 第27-30页 |
| ·菌株及质粒 | 第27页 |
| ·主要培养基 | 第27-28页 |
| ·试剂 | 第28-30页 |
| ·试剂盒 | 第30页 |
| ·核酸分子量标准 | 第30页 |
| ·限制性内切酶及工具酶 | 第30页 |
| ·仪器设备 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-37页 |
| ·阿维链霉菌的培养方法 | 第30-31页 |
| ·阿维链霉菌基因组DNA提取 | 第31-32页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·PCR | 第32-33页 |
| ·PCR产物回收 | 第33-34页 |
| ·克隆载体的构建 | 第34页 |
| ·感受态细胞制备 | 第34-35页 |
| ·转化 | 第35页 |
| ·转化子的鉴定 | 第35-37页 |
| ·DNA测序 | 第37页 |
| ·序列分析 | 第37页 |
| ·实验结果与分析 | 第37-50页 |
| ·阿维链霉菌的DNA提取 | 第37-39页 |
| ·PCR | 第39页 |
| ·克隆载体pTA2-sanos基因的构建 | 第39页 |
| ·PCR和酶切鉴定 | 第39-42页 |
| ·DNA序列分析 | 第42-44页 |
| ·sanos在阿维链霉菌基因组中的位置 | 第44-45页 |
| ·saNOS的基本理化性质和一级结构分析 | 第45-46页 |
| ·saNOS亲疏水性分析 | 第46-47页 |
| ·saNOS二级结构分析 | 第47-48页 |
| ·saNOS三级空间结构分析 | 第48-49页 |
| ·saNOS蛋白同源进化树构建 | 第49-50页 |
| ·本章小结 | 第50-53页 |
| 第3章 阿维链霉菌一氧化氮合酶在大肠杆菌中的表达 | 第53-69页 |
| ·实验材料 | 第53-55页 |
| ·菌株及质粒 | 第53页 |
| ·主要培养基 | 第53-54页 |
| ·试剂 | 第54-55页 |
| ·试剂盒 | 第55页 |
| ·核酸及蛋白质分子量标准 | 第55页 |
| ·限制性内切酶及工具酶 | 第55页 |
| ·仪器设备 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-60页 |
| ·重组质粒pET28a-sanos基因的构建 | 第55-57页 |
| ·重组子的阳性菌落筛选 | 第57页 |
| ·菌落PCR筛选 | 第57页 |
| ·表达载体pET28a-sanos鉴定 | 第57页 |
| ·外源基因测序验证 | 第57-58页 |
| ·外源基因的诱导表达 | 第58页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第58-59页 |
| ·外源基因表达条件的优化 | 第59页 |
| ·酶活初步测定 | 第59-60页 |
| ·实验结果与分析 | 第60-67页 |
| ·重组质粒pET28a-saNOS基因的构建 | 第60页 |
| ·表达载体pET28a-saNOS鉴定 | 第60-62页 |
| ·测序结果分析 | 第62-65页 |
| ·外源基因的诱导表达及条件优化 | 第65-67页 |
| ·saNOS酶活初步测定 | 第67页 |
| ·本章小结 | 第67-69页 |
| 第4章 阿维链霉菌一氧化氮合酶的生物功能初步研究 | 第69-103页 |
| ·实验材料 | 第69-75页 |
| ·菌株及质粒 | 第69-70页 |
| ·主要培养基 | 第70-72页 |
| ·试剂 | 第72-74页 |
| ·试剂盒 | 第74页 |
| ·核酸分子量标准 | 第74页 |
| ·限制性内切酶及工具酶 | 第74页 |
| ·仪器设备 | 第74-75页 |
| ·实验方法 | 第75-84页 |
| ·引物设计 | 第75页 |
| ·重组质粒pIJ8630-saNOS基因的构建 | 第75-77页 |
| ·孢子悬液制备 | 第77页 |
| ·链霉菌的接合转导 | 第77-78页 |
| ·突变株筛选 | 第78页 |
| ·S.coelicolor基因组提取 | 第78-79页 |
| ·S.coelicolor的RNA提取 | 第79-80页 |
| ·RT-PCR反转录体系 | 第80页 |
| ·菌种的活化培养 | 第80页 |
| ·形态分化的变化 | 第80-81页 |
| ·SNP、CPTIO对S.avermitis生长、NO含量和次生代谢的影响 | 第81页 |
| ·L-NMMA对S.avermitis生长、NO含量和次生代谢的影响 | 第81页 |
| ·发酵参数测定 | 第81-84页 |
| ·实验结果与分析 | 第84-101页 |
| ·重组质粒pIJ8630-saNOS基因的构建 | 第84页 |
| ·重组质粒pIJ8630-saNOS鉴定 | 第84-86页 |
| ·测序结果分析 | 第86-89页 |
| 4 3.4 突变株M-1的构建及PCR验证 | 第89-90页 |
| ·RT-PCR法检测突变株M-1的saNOS表达 | 第90-92页 |
| ·saNOS的表达对天蓝色链霉菌的形态分化的影响 | 第92-93页 |
| ·saNOS的表达对天蓝色链霉菌生长、NO含量和次生代谢的影响 | 第93-96页 |
| ·SNP、CPTIO的添加对阿维链霉菌形态分化的影响 | 第96-97页 |
| ·SNP、CPTIO对阿维链霉菌生长、NO含量和次生代谢的影响 | 第97-99页 |
| ·L-NMMA对阿维链霉菌生长、NO含量和次生代谢的影响 | 第99-101页 |
| ·本章小结 | 第101-103页 |
| 第五章 结论与展望 | 第103-105页 |
| ·结论 | 第103-104页 |
| ·展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-113页 |
| 附录 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
