中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-8页 |
第一部分 文献综述 | 第8-27页 |
1、 导言 | 第8-9页 |
2、 脂肪细胞膜蛋白的研究历史 | 第9-12页 |
3、 特异性脂肪细胞膜蛋白的应用前景 | 第12-14页 |
3.1 改善胴体品质的研究 | 第12-13页 |
3.2 脂肪细胞分化的分子机理研究 | 第13页 |
3.3 在肥胖病治疗中的应用 | 第13-14页 |
4、 猪特异性脂肪细胞膜蛋白研究现状 | 第14-19页 |
4.1 前列腺素与脂肪细胞分化研究 | 第15-18页 |
4.2 PAMP分子生物学研究 | 第18-19页 |
5、 全长cDNA的获得—RACE及其它方法进展 | 第19-27页 |
5.1 RACE的原理 | 第20-22页 |
5.2 RACE的优点 | 第22页 |
5.3 RACE的改良方法 | 第22-27页 |
第二部分 猪特异性脂肪细胞膜蛋白基因cDNA的克隆和测序 | 第27-49页 |
1、 导言 | 第27页 |
2、 实验材料 | 第27-32页 |
2.1 菌株利克隆载体 | 第27-28页 |
2.2 实验动物组织样与血样 | 第28页 |
2.3 酶与试剂盒 | 第28页 |
2.4 仪器和设备 | 第28-29页 |
2.5 试剂和溶液 | 第29-32页 |
3、 实验方法 | 第32-43页 |
3.1 总RNA的提取 | 第32-33页 |
3.2 mRNA的分离与纯化(磁珠法) | 第33-35页 |
3.3 RACE操作流程 | 第35-37页 |
3.4 DNA凝胶纯化 | 第37-38页 |
3.5 凝胶纯化后的PCR产物的克隆 | 第38-40页 |
3.6 感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第40-41页 |
3.7 质粒DNA的小规模抽提: | 第41页 |
3.8 Eco R I酶切质粒鉴定 | 第41-42页 |
3.9 猪血DNA的提取 | 第42-43页 |
3.10 RNA变性电泳 | 第43页 |
4. 结果分析 | 第43-49页 |
4.1 总RNA、DNA提取及mRNA分离结果 | 第43-45页 |
4.2 RACE反应体系的建立 | 第45页 |
4.3 RACE产物的克隆和序列分析 | 第45-48页 |
4.4 内含子序列初探 | 第48-49页 |
第三部分 结论与讨论 | 第49-55页 |
1. 脂肪组织总RNA制备 | 第49页 |
2. 5’端RACE技术体系的建立 | 第49-51页 |
2.1 RNA质量 | 第50页 |
2.2 PCR扩增 | 第50-51页 |
3. RACE产物的克隆 | 第51-52页 |
3.1 DNA片段的回收 | 第51页 |
3.2 CaCl_2法制备感受态细胞 | 第51-52页 |
3.3 连接 | 第52页 |
3.4 酶切鉴定 | 第52页 |
4. 测序结果序列分析 | 第52-53页 |
5. 内含子序列分析 | 第53-54页 |
6. 小结 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-60页 |
致谢 | 第60页 |