| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表(Abbreviations) | 第12-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-50页 |
| ·苏云金芽胞杆菌简介 | 第14-16页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的分类 | 第15页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的多样性 | 第15-16页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的结构与功能 | 第16-25页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的一级结构与功能 | 第16-18页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的空间结构与功能 | 第18-25页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的空间结构 | 第18-22页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白结构域的功能 | 第22-25页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的表达与调控 | 第25-38页 |
| ·转录水平的调控 | 第26-30页 |
| ·依赖芽胞形成的杀虫晶体蛋白基因的转录调控 | 第26-27页 |
| ·非依赖于芽胞形成的杀虫晶体蛋白基因的转录调控 | 第27-28页 |
| ·启动子及上游区和σ因子与转录调控 | 第28-30页 |
| ·转录后水平的调控 | 第30-31页 |
| ·mRNA 3′末端的终止子结构 | 第30-31页 |
| ·mRNA 5′末端的稳定子 | 第31页 |
| ·翻译水平的调控 | 第31-32页 |
| ·翻译后水平的调控 | 第32-38页 |
| ·伴胞晶体的形成 | 第32-38页 |
| ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的抗性以及防治措施 | 第38-40页 |
| ·苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白 | 第40-45页 |
| ·营养期杀虫蛋白类型及其杀虫机理 | 第40-44页 |
| ·Vip1和Vip2及其作用机理 | 第41-42页 |
| ·Vip3蛋白及其作用机理 | 第42-44页 |
| ·营养期杀虫蛋白的应用 | 第44-45页 |
| ·转vip基因植物 | 第44页 |
| ·构建vip融合基因 | 第44-45页 |
| ·"无毒"晶体蛋白及Cry7Ba1杀虫晶体蛋白的简介 | 第45-49页 |
| ·"无毒"晶体蛋白简介 | 第45页 |
| ·Cry7Ba1杀虫晶体蛋白的简介 | 第45-46页 |
| ·晶体蛋白溶解性与杀虫活性的关系 | 第46-48页 |
| ·杀虫晶体蛋白的结构化学及其杀虫特性 | 第48-49页 |
| ·研究目的和意义 | 第49-50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-63页 |
| ·实验材料 | 第50-56页 |
| ·菌株与质粒 | 第50-55页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·细菌用抗生素及其培养温度 | 第55-56页 |
| ·试剂与器材 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·仪器 | 第56页 |
| ·供试昆虫 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-63页 |
| ·DNA操作 | 第56-57页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的制备 | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第57页 |
| ·质粒DNA的纯化 | 第57页 |
| ·DNA的体外重组操作 | 第57页 |
| ·重组质粒的转化及转化子的筛选鉴定 | 第57-58页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第57-58页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的电转化 | 第58页 |
| ·大肠杆菌转化子的筛选 | 第58页 |
| ·苏云金芽胞杆菌重组菌的筛选 | 第58页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE及其定量 | 第58-60页 |
| ·晶体蛋白SDS-PAGE样品的制备 | 第58页 |
| ·营养期杀虫蛋白样品的制备 | 第58-59页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备 | 第59页 |
| ·电泳、染色及脱色 | 第59页 |
| ·蛋白的密度定量 | 第59页 |
| ·生测用晶体蛋白溶液的制备 | 第59-60页 |
| ·苏云金芽胞杆菌伴胞晶体显微镜观察 | 第60页 |
| ·毒力的生物测定 | 第60页 |
| ·PCR扩增 | 第60-63页 |
| ·引物序列 | 第60-62页 |
| ·DNA的PCR扩增 | 第62-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-115页 |
| ·杀虫晶体蛋白C-半段使Vip3Aa7蛋白以包含体的形式大量表达 | 第63-90页 |
| ·Cry1C的C-半段使Vip3Aa7蛋白以包含体的形式大量表达 | 第63-79页 |
| ·cry1C的BtⅠ-BtⅡ启动子和终止子对Vip3Aa7蛋白表达的影响 | 第63-71页 |
| ·Cry1C的DomainⅢ和C-半段使Vip3Aa7蛋白以包含体的形式大量表达 | 第71-73页 |
| ·cry1C的启动子上游调控区提高了Vip3Aa7蛋白的表达量 | 第73-76页 |
| ·Cry1C的C-半段显著提高了Vip3Aa7蛋白的表达量 | 第76-79页 |
| ·Cry1Ac的C-半段使Vip3Aa7蛋白以包含体的形式大量表达 | 第79-82页 |
| ·含Cry1Ac的C-半段编码区及vip3Aa7-s重组质粒pBMB0173的构建 | 第79-81页 |
| ·Cry1Ac的C-半段显著提高了Vip3Aa7蛋白的表达量使其形成包含体 | 第81-82页 |
| ·Cry7Ba1的C-半段使Vip3Aa7蛋白以包含体的形式大量表达 | 第82-84页 |
| ·含Cry7Ba1的C-半段编码区及vip3Aa7-s重组质粒pBMB0187的构建 | 第83页 |
| ·Cry7Ba1的C-半段对Vip3Aa7表达量、包含体形成和毒性的的影响 | 第83-84页 |
| ·辅助蛋白p20提高了Vip3Aa7蛋白的表达量 | 第84-90页 |
| ·含辅助蛋白p20的重组质粒pBMB0177的构建 | 第84-86页 |
| ·含辅助蛋白p20的重组菌的验证 | 第86-87页 |
| ·辅助蛋白p20增加了Vip3Aa7蛋白的表达量 | 第87-88页 |
| ·辅助蛋白p20不能使Vip3Aa7形成菱形晶体 | 第88-89页 |
| ·辅助蛋白p20不影响Vip3Aa7的毒性 | 第89-90页 |
| ·Cry1的C-半段显著提高了Cry2Aa和Cry3Aa蛋白的表达量 | 第90-102页 |
| ·Cry1晶体蛋白的C-半段显著提高了Cry2Aa蛋白的表达量 | 第91-97页 |
| ·Cry1C的C-半段显著提高了Cry2Aa蛋白的表达量 | 第91-95页 |
| ·Cry1Ac的C-半段显著提高了Cry2Aa蛋白的表达量 | 第95-97页 |
| ·Cry1晶体蛋白C-半段显著提高了Cry3Aa蛋白的表达量 | 第97-102页 |
| ·Cry1C的C-半段显著提高了Cry3Aa蛋白的表达量 | 第97-101页 |
| ·Cry1Ac的C-半段显著提高了Cry3Aa蛋白的表达量 | 第101-102页 |
| ·Cry1蛋白的N-半段和C-半段对Cry7Ba1蛋白表达的影响 | 第102-115页 |
| ·Cry1Ac和Cry1C的C-半段对Cry7Ba1蛋白表达的影响 | 第104-109页 |
| ·Cry1Ac和Cry1C的C-半段编码区替换Cry7Ba1的C-半段编码区构建重组质粒pBMB0184和pBMB0185 | 第104-107页 |
| ·Cry1Ac和Cry1C的C-半段提高了Cry7Ba1蛋白的溶解性 | 第107-108页 |
| ·Cry1Ac和Cry1C的C-半段使Cry7Ba1蛋白形成无规则包含体 | 第108-109页 |
| ·Cry1Ac和Cry1C的C-半段不影响Cry7Ba1蛋白的毒性 | 第109页 |
| ·Cry1C和Cry1Ac的N-半段对Cry7Ba1蛋白表达的影响 | 第109-115页 |
| ·Cry1C和Cry1Ac的N-半段编码区替换Cry7Ba1的N-半段编码区构建重组质粒pBMB0181和pBMB0183 | 第109-113页 |
| ·Cry1C和Cry1Ac的N-半段对Cry7Ba1蛋白的溶解性没有影响 | 第113页 |
| ·Cry1C和Cry1Ac的N-半段使Cry7Ba1蛋白形成无规则包含体 | 第113-114页 |
| ·Cry1C和Cry1Ac的N-半段决定Cry7Ba1重组蛋白的毒性 | 第114-115页 |
| 4 结论与讨论 | 第115-118页 |
| ·杀虫晶体蛋白的C-半段使Vip3Aa7蛋白形成包含体并且显著提高蛋白表达量 | 第115-116页 |
| ·Cry1蛋白的C-半段提高了Cry2Aa和Cry3Aa蛋白表达的表达量 | 第116页 |
| ·Cry1的C-半段提高Cry7Ba1蛋白的溶解性并且恢复了其毒性 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-131页 |
| 已发表和待发表的论文 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132页 |
