| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一部 分文献综述 | 第12-36页 |
| 第一章 哺乳动物的性别决定相关基因的作用机理 | 第12-20页 |
| 摘要 | 第12页 |
| 1 性腺发育机理 | 第12-13页 |
| 2 与睾丸命运决定有关的染色体基因 | 第13-17页 |
| ·Sry基因 | 第13-14页 |
| ·Sox9基因 | 第14-15页 |
| ·Dmrt1基因 | 第15页 |
| ·威尔姆氏肿瘤抑制基因(Wt1) | 第15页 |
| ·抗牟勒氏管激素基因(Amh) | 第15-16页 |
| ·类固醇生成因子1(Sf1) | 第16-17页 |
| 3 与卵巢命运决定有关的染色体基因 | 第17-18页 |
| ·Dax1基因 | 第17页 |
| ·Sox3基因 | 第17页 |
| ·Wnt4基因 | 第17-18页 |
| 4 展望 | 第18-20页 |
| 第二章 Sox9基因功能分析及其研究进展 | 第20-27页 |
| 摘要 | 第20页 |
| 1 Sox9基因的结构及蛋白功能特点 | 第20-22页 |
| ·Sox9蛋白识别序列的特异性 | 第21页 |
| ·Sox9是典型的转录因子 | 第21页 |
| ·Sox9蛋白有许多的磷酸化位点 | 第21-22页 |
| 2 Sox9基因在性别分化中的表达作用 | 第22-23页 |
| 3 Sox9基因与软骨形成 | 第23-25页 |
| 4 与Sox9有关的CD症及性反转 | 第25-26页 |
| 5 Sox9在其他发育中的作用 | 第26-27页 |
| 第三章 生物信息学模拟在新基因研究的应用 | 第27-36页 |
| 1 表达序列标签(EST) | 第27-28页 |
| 2 电子克隆 | 第28-30页 |
| ·电子克隆的基本策略 | 第28-29页 |
| ·EST序列的获取与拼接延伸 | 第29-30页 |
| 3 序列比对和数据库搜索 | 第30-31页 |
| 4 核酸的序列分析 | 第31-33页 |
| ·编码区(Coding sequence,CDS)分析 | 第31-32页 |
| ·基因的电子定位 | 第32页 |
| ·基因结构分析 | 第32-33页 |
| 5 蛋白质结构和功能的预测 | 第33-34页 |
| ·预测蛋白质的物理性质 | 第33页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第33页 |
| ·其它特殊局部结构 | 第33-34页 |
| ·蛋白质的三维结构 | 第34页 |
| 6 小结 | 第34-35页 |
| 7 本实验的目的和意义 | 第35-36页 |
| 第二部分 实验研究 | 第36-79页 |
| 第四章 猪Sox9基因cDNA全长的克隆测序 | 第36-58页 |
| 1 材料与试剂 | 第36-39页 |
| ·实验动物 | 第36页 |
| ·网络资源及软件 | 第36页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第37-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-49页 |
| ·猪Sox9基因的电子克隆 | 第39页 |
| ·组织RNA的提取与检测 | 第39-40页 |
| ·'RACE引物设计 | 第40-42页 |
| ·5'RACE | 第42-44页 |
| ·中间序列扩增和3'RACE引物设计 | 第44-45页 |
| ·用接头引物反转录得到基因组cDNA | 第45页 |
| ·ORF以及中间序列的扩增 | 第45-46页 |
| ·3'RACE | 第46-47页 |
| ·cDNA克隆测序 | 第47-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-56页 |
| ·猪EST序列的获取 | 第49页 |
| ·EST序列的拼接与分析 | 第49-50页 |
| ·总RNA提取的检测 | 第50-51页 |
| ·5'RACE扩增5'UTR | 第51-52页 |
| ·ORF以及中间片段的扩增结果 | 第52-53页 |
| ·3'RACE扩增结果 | 第53页 |
| ·测序结果分析 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| ·电子克隆技术的优缺点 | 第56页 |
| ·TOPO TA克隆技术 | 第56-58页 |
| 第五章 蛋白质序列的生物信息学分析 | 第58-69页 |
| 1 材料与方法 | 第58-60页 |
| ·电子基因定位与启动子的预测 | 第58页 |
| ·ORF区预测 | 第58页 |
| ·蛋白质氨基酸组成、分子量和等电点分析 | 第58-59页 |
| ·蛋白质疏水性分析 | 第59页 |
| ·蛋白质信号肽预测 | 第59页 |
| ·跨膜区预测 | 第59页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第59页 |
| ·蛋白质功能结构域预测 | 第59-60页 |
| ·蛋白质氨基酸序列间的多重比对和分子系统发生分析 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-67页 |
| ·电子基因定位与启动子的预测 | 第60-61页 |
| ·ORF分析 | 第61页 |
| ·氨基酸组成、分子量和等电点 | 第61-62页 |
| ·疏水性分析 | 第62页 |
| ·信号肽分析 | 第62-63页 |
| ·跨膜区分析 | 第63页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第63-64页 |
| ·蛋白质结构域预测 | 第64-65页 |
| ·蛋白质序列间多重比对和分子系统发生分析 | 第65-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 第六章 猪Sox9基因的组织表达谱分析 | 第69-79页 |
| 1 材料与试剂 | 第69页 |
| ·实验样品 | 第69页 |
| ·主要试剂 | 第69页 |
| ·主要仪器 | 第69页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第69页 |
| 2 实验方法 | 第69-74页 |
| ·各组织RNA的提取 | 第69-70页 |
| ·RNA浓度和纯度检测 | 第70页 |
| ·反转录得到基因组cDNA | 第70-71页 |
| ·引物设计 | 第71页 |
| ·普通PCR扩增 | 第71-72页 |
| ·Real-time PCR定量检测 | 第72-74页 |
| 3 结果与分析 | 第74-77页 |
| ·Sox9基因检测反转录效果 | 第74页 |
| ·猪Sox9和GAPDH基因的荧光定量 | 第74-75页 |
| ·猪Sox9基因mRNA相对表达量检测 | 第75-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| 全文总结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-85页 |
| 附录 | 第85-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第94页 |