| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 1 文献综述 | 第17-46页 |
| ·纤维蛋白原与纤维蛋白原裂解酶 | 第17-25页 |
| ·纤维蛋白原 | 第17-22页 |
| ·纤维蛋白原裂解酶 | 第22-25页 |
| ·蛇毒类凝血酶 | 第25-36页 |
| ·蛇毒类凝血酶概述 | 第25-26页 |
| ·蛇毒类凝血酶的结构特征 | 第26-31页 |
| ·蛇毒类凝血酶的生理生化性质 | 第31-34页 |
| ·蛇毒类凝血酶的医药价值与临床应用 | 第34-35页 |
| ·蛇毒类凝血酶与其他抗血栓药物的比较 | 第35-36页 |
| ·蛇毒类凝血酶的制备 | 第36-44页 |
| ·天然蛇毒类凝血酶的制备 | 第36-37页 |
| ·蛇毒类凝血酶基因的重组表达 | 第37页 |
| ·重组蛇毒类凝血酶可溶性表达策略 | 第37-40页 |
| ·重组蛇毒类凝血酶样品预处理 | 第40-41页 |
| ·蛇毒类凝血酶的分离纯化策略 | 第41-44页 |
| ·本论文选题依据和研究内容 | 第44-46页 |
| ·选题依据 | 第44-45页 |
| ·研究内容 | 第45-46页 |
| 2 大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的分子克隆与表达 | 第46-72页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验材料与仪器 | 第46-47页 |
| ·基因、质粒和菌株 | 第46-47页 |
| ·工具酶 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·实验仪器 | 第47页 |
| ·溶液配制 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-52页 |
| ·蛋白质可溶性预测 | 第47-48页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第48页 |
| ·质粒的提取 | 第48页 |
| ·样品DNA片段的切胶回收 | 第48页 |
| ·样品DNA片段的精制 | 第48页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第48-49页 |
| ·限制性酶切反应 | 第49页 |
| ·线性DNA末端的去磷酸化 | 第49页 |
| ·线性DNA片段末端的平端化和磷酸化 | 第49页 |
| ·线性DNA的连接 | 第49-50页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第50页 |
| ·重组菌株的培养和目的蛋白的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测(SDS-PAGE) | 第51页 |
| ·蛋白质免疫印迹检测(Western blotting) | 第51-52页 |
| ·蛋白浓度定量 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-70页 |
| ·蛋白可溶性预测 | 第52-53页 |
| ·基因克隆和载体构建的实验流程 | 第53-57页 |
| ·大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因点突变修复 | 第57-60页 |
| ·大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因的亚克隆 | 第60-63页 |
| ·三种重组融合表达载体的构建 | 第63-68页 |
| ·三种融合蛋白对可溶表达的影响 | 第68-70页 |
| ·重组菌株的培养和目的蛋白的诱导表达 | 第70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 3 重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的样品预处理及分离纯化 | 第72-93页 |
| ·引言 | 第72页 |
| ·实验材料与设备 | 第72-73页 |
| ·实验材料 | 第72-73页 |
| ·实验仪器 | 第73页 |
| ·溶液配制 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-77页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第73页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第73-74页 |
| ·蛋白样品预处理 | 第74页 |
| ·大肠杆菌基因组DNA的提取 | 第74页 |
| ·植物基因组DNA的提取 | 第74页 |
| ·核酸酶活性测定 | 第74页 |
| ·酰胺水解活力的检测 | 第74-75页 |
| ·纤维蛋白酶原凝结活性 | 第75页 |
| ·纤维蛋白原裂解活性 | 第75页 |
| ·变性聚丙烯凝胶电泳检测(SDS-PAGE) | 第75页 |
| ·蛋白质免疫印迹检测(Western blotting) | 第75页 |
| ·蛋白浓度定量 | 第75-76页 |
| ·蛇毒类凝血酶样品的浓缩和脱盐 | 第76页 |
| ·重组蛇毒类凝血酶纯化方法 | 第76-77页 |
| ·实验结果 | 第77-91页 |
| ·人工核酸酶用于重组蛇毒类凝血酶样品预处理 | 第77-83页 |
| ·四步柱层析法分离纯化重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶 | 第83-90页 |
| ·重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶纯化产物鉴定 | 第90-91页 |
| ·讨论 | 第91-92页 |
| ·重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶蛋白样品预处理 | 第91页 |
| ·重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的分离纯化 | 第91-92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| 4 重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的性质表征 | 第93-125页 |
| ·引言 | 第93页 |
| ·实验材料与设备 | 第93-94页 |
| ·实验材料 | 第93-94页 |
| ·实验仪器 | 第94页 |
| ·溶液配制 | 第94页 |
| ·实验方法 | 第94-96页 |
| ·纤维蛋白酶原凝结活性 | 第94页 |
| ·纤维蛋白原裂解活性的测定 | 第94页 |
| ·酰胺水解活力测定 | 第94页 |
| ·最适温度和最适pH值的测定 | 第94-95页 |
| ·抑制剂、还原剂和螯合剂对酶活力的影响 | 第95页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第95页 |
| ·序列比对和同源模建 | 第95-96页 |
| ·结果与分析 | 第96-112页 |
| ·最适温度和最适pH | 第96-97页 |
| ·重组类凝血酶生理活性 | 第97-99页 |
| ·抑制剂对于重组类凝血酶的纤维蛋白原裂解活力影响 | 第99-103页 |
| ·金属离子对于重组类凝血酶的纤维蛋白原裂解活力影响 | 第103-104页 |
| ·纤维蛋白原裂解活力的对照实验 | 第104-106页 |
| ·抑制剂对于重组类凝血酶酰胺水解活力的影响 | 第106-107页 |
| ·金属离子对于重组类凝血酶酰胺水解活力的影响 | 第107-110页 |
| ·同源模建和抑制模拟 | 第110-112页 |
| ·讨论 | 第112-123页 |
| ·重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的基本性质 | 第112页 |
| ·丝氨酸蛋白酶抑制剂对重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的影响 | 第112-117页 |
| ·还原剂对重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的影响 | 第117-118页 |
| ·凝血酶天然抑制剂对重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的影响 | 第118页 |
| ·金属离子对重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶酰胺水解活力的影响 | 第118-119页 |
| ·金属离子对重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶纤维蛋白原裂解活力的影响 | 第119-120页 |
| ·金属离子螯合剂EDTA对重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的影响 | 第120页 |
| ·过渡金属离子对重组大连蛇岛蝮蛇类凝血酶的抑制机理推测 | 第120-123页 |
| ·小结 | 第123-125页 |
| 结论与展望 | 第125-127页 |
| 结论 | 第125-126页 |
| 展望 | 第126-127页 |
| 创新点摘要 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-144页 |
| 附录A 专有名词缩写 | 第144-146页 |
| 附录B 质粒图谱 | 第146-149页 |
| 附录C 常用仪器设备 | 第149-150页 |
| 附录D 常用溶液配制 | 第150-152页 |
| 附录E 质粒DNA的提取 | 第152-153页 |
| 附录F DNA片段的切胶回收 | 第153-154页 |
| 附录G DNA片断的精制 | 第154-155页 |
| 附录H 大肠杆菌基因组DNA的提取 | 第155-156页 |
| 附录I 植物基因组DNA的提取 | 第156-157页 |
| 附录J 人工核酸酶R5的合成与鉴定 | 第157-158页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第158-159页 |
| 攻读博士学位期间专利申请授权情况 | 第159-160页 |
| 致谢 | 第160-161页 |
| 个人简历 | 第161-162页 |
