| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-25页 |
| 1 板栗疫病及其流行 | 第10-11页 |
| 2 板栗疫病菌与低毒病毒系统 | 第11-14页 |
| ·板栗疫病菌 | 第11-12页 |
| ·低毒现象与低毒病毒 | 第12-14页 |
| ·低毒病毒的发现 | 第12-13页 |
| ·低毒病毒的基因组和侵染性克隆 | 第13-14页 |
| 3 低毒病毒和板栗疫病菌相互作用的研究 | 第14-17页 |
| ·与低毒力相关的蛋白酶 | 第14-15页 |
| ·G蛋白信号传导对真菌毒力的影响 | 第15-16页 |
| ·肌醇三磷酸(IP3)/Ca~(2+)/钙调蛋白信号传导途径对真菌毒力的影响 | 第16-17页 |
| ·与毒力相关的结构蛋白 | 第17页 |
| 4 板栗疫病菌cDNA芯片及其应用 | 第17-18页 |
| 5 KU80与同源重组效率 | 第18页 |
| 6.Cyclophilins家族蛋白 | 第18-23页 |
| ·Cyclophilin的发现 | 第19页 |
| ·Cyclophilins家族蛋白分类和定位 | 第19-20页 |
| ·Cyclophilins的PPIase活性和催化蛋白折叠活性 | 第20-21页 |
| ·Cyclophilins与Ca~(2+)信号传导途径 | 第21-22页 |
| ·Cyclophilins与病毒的关系 | 第22-23页 |
| ·真菌cyclophilins与病原菌毒力 | 第23页 |
| 7 课题研究目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料和方法 | 第25-44页 |
| 1 菌种及培养条件 | 第25-26页 |
| ·细菌菌种及培养条件 | 第25页 |
| ·真菌菌种及培养条件 | 第25-26页 |
| 2 培养基 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第26页 |
| ·LB培养基 | 第26页 |
| ·LA培养基 | 第26页 |
| ·板栗疫病菌培养基 | 第26-27页 |
| ·PDA培养基 | 第26页 |
| ·EP完全培养基 | 第26-27页 |
| 3 抗生素及其使用浓度 | 第27-28页 |
| 4 质粒DNA的提取 | 第28-30页 |
| ·质粒DNA的小规模提取 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第29-30页 |
| 5 DNA的酶切 | 第30页 |
| 6 DNA片段的回收 | 第30页 |
| 7 DNA的连接反应 | 第30页 |
| 8 质粒DNA的转化 | 第30-32页 |
| ·氯化铷法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第31-32页 |
| ·质粒DNA的热击转化 | 第32页 |
| 9.PCR反应 | 第32-34页 |
| ·PCR反应体系 | 第32页 |
| ·PCR反应条件: | 第32页 |
| ·融合PCR反应 | 第32-33页 |
| ·PCR反应引物 | 第33-34页 |
| 10 真菌原生质体的制备 | 第34-35页 |
| 11 真菌原生质体转化 | 第35-36页 |
| 12 真菌总DNA的提取 | 第36-37页 |
| 13 真菌总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 14. 5’RACE反应 | 第38-39页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第38-39页 |
| ·快速合成第二链 | 第39页 |
| 15 荧光定量PCR | 第39-41页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第39-40页 |
| ·荧光定量PCR | 第40-41页 |
| 16 Southern杂交 | 第41-43页 |
| ·向上毛细管转移法进行Southern印迹 | 第41页 |
| ·DNA印迹的杂交分析 | 第41-43页 |
| ·预杂交 | 第41-42页 |
| ·探针标记 | 第42页 |
| ·洗膜 | 第42-43页 |
| 17 真菌毒力测试 | 第43-44页 |
| ·试验用板栗树枝 | 第43页 |
| ·接种 | 第43页 |
| ·病斑测量 | 第43-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-55页 |
| 1 板栗疫病菌cpcyp1基因分析 | 第44-47页 |
| ·cpcyp1基因序列的克隆与分析 | 第44-46页 |
| ·CPCYP1蛋白与其他Cyelophilin的氨基酸序列比对 | 第46-47页 |
| 2 cpcyp1基因缺失突变体的构建 | 第47-49页 |
| 3 cpcyp1基因mRNA的相对表达量 | 第49-50页 |
| 4 △cpcyp1突变体的菌落表型 | 第50-51页 |
| 5 △cpcyp1突变体对CsA的敏感性测试 | 第51-52页 |
| 6 △cpcyp1突变体漆酶活性测试 | 第52-53页 |
| 7 △cpcyp1突变体的致病性 | 第53-54页 |
| 8 CPCYP1不影响dsRNA低毒病毒的累积量 | 第54-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录1 实验中用到的主要仪器 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第68页 |
