| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-24页 |
| 1 伪狂犬病的流行、病原特征及其检测方法研究进展 | 第10-18页 |
| ·流行状况 | 第10页 |
| ·伪狂犬病病毒的病原特征 | 第10-11页 |
| ·伪狂犬病病毒的分子生物学特征 | 第11-13页 |
| ·伪狂犬病病毒基因组结构 | 第11页 |
| ·结构蛋白及其功能 | 第11-13页 |
| ·猪伪狂犬病病毒检测方法研究进展 | 第13-18页 |
| ·病毒分离鉴定 | 第13页 |
| ·动物接种试验 | 第13页 |
| ·血清学检测方法 | 第13-15页 |
| ·免疫学诊断方法 | 第15-17页 |
| ·变态反应 | 第17页 |
| ·分子生物学诊断 | 第17-18页 |
| 2 实时荧光定量PCR研究进展及其应用 | 第18-24页 |
| ·实时荧光定量PCR检测技术的原理 | 第19-22页 |
| ·实时荧光定量PCR的分类 | 第19-20页 |
| ·Taqman探针实时荧光定量PCR原理 | 第20-22页 |
| ·在动物传染病病原体检测上的应用 | 第22-24页 |
| 引言 | 第24-25页 |
| 试验一 猪伪狂犬病病毒PCR检测方法的建立 | 第25-31页 |
| 1 材料与方法 | 第25-27页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·毒株与细胞 | 第25页 |
| ·细胞培养基 | 第25页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-27页 |
| ·引物的合成 | 第25页 |
| ·病毒培养 | 第25页 |
| ·PRV模板DNA的制备 | 第25-26页 |
| ·伪狂犬病病毒PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR特异性测 | 第27页 |
| ·PCR敏感性测定 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-29页 |
| ·不同核酸提取方法的PCR扩增 | 第27页 |
| ·PCR反应优化结果 | 第27-28页 |
| ·Mg2+浓度的选择 | 第27-28页 |
| ·引物浓度的选择 | 第28页 |
| ·dNTPs最佳浓度的选择 | 第28页 |
| ·复性温度的选择 | 第28页 |
| ·PCR特异性测定 | 第28-29页 |
| ·PCR敏感性测定 | 第29页 |
| 3 结论与讨论 | 第29-31页 |
| 试验二 鉴别猪伪狂犬病病毒野毒与疫苗毒PCR检测方法的建立 | 第31-43页 |
| 1 材料与方法 | 第31-34页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·毒株与菌种 | 第31页 |
| ·质粒工具酶 | 第31页 |
| ·其它化学试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-34页 |
| ·引物的设计与合成 | 第31-32页 |
| ·病毒培养 | 第32页 |
| ·PRV模板DNA的制备 | 第32页 |
| ·临床样品模板DNA的制备 | 第32页 |
| ·伪狂犬病毒gH、gE基因单一PCR检测方法的建立 | 第32-33页 |
| ·gH、gE基因单一PCR反应条件的优化 | 第33页 |
| ·单一PCR检测方法的特异性试验 | 第33页 |
| ·单一PCR检测方法的敏感性测定 | 第33页 |
| ·gH、gE基因双重PCR检测方法的建立 | 第33-34页 |
| ·对病料进行复合PCR检测 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-41页 |
| ·单一PCR检测方法的扩增结果 | 第34页 |
| ·单一PCR反应体系优化结果 | 第34-35页 |
| ·gH基因单一PCR优化 | 第34页 |
| ·gE基因单一PCR优化 | 第34-35页 |
| ·单一PCR检测方法的特异性分析 | 第35-36页 |
| ·单一PCR检测方法的敏感性测定结果 | 第36-37页 |
| ·双重PCR检测方法的扩增结果 | 第37-38页 |
| ·双重PCR反应体系的优化结果 | 第38-39页 |
| ·引物浓度的优化 | 第38页 |
| ·双重PCR退火温度的优化 | 第38-39页 |
| ·双重PCR方法特异性试验结果 | 第39页 |
| ·双重PCR方法敏感性测定结果 | 第39-40页 |
| ·重复性试验结果 | 第40页 |
| ·复合PCR病料检测结果 | 第40-41页 |
| 3 结论与讨论 | 第41-43页 |
| 试验三 鉴别猪伪狂犬病病毒野毒与疫苗毒荧光定量PCR方法的建立 | 第43-60页 |
| 1 材料与方法 | 第43-49页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·毒株与菌种 | 第43页 |
| ·质粒工具酶 | 第43页 |
| ·其它化学试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·常用溶液及培养基 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-49页 |
| ·引物的设计与合成 | 第44页 |
| ·病毒培养 | 第44页 |
| ·PRV模板DNA的制备 | 第44页 |
| ·伪狂犬病毒gH、gE基因常规PCR(Con-PCR)扩增 | 第44-45页 |
| ·gH基因Con-PCR扩增 | 第45页 |
| ·gE基因Con-PCR扩增 | 第45页 |
| ·gH、gE基因的克隆与鉴定 | 第45-47页 |
| ·gH、gE基因的序列测定 | 第47页 |
| ·实时荧光PCR检测方法的建立 | 第47-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-57页 |
| ·PRV gH、gE基因PCR扩增 | 第49页 |
| ·PRV gH、gE基因克隆及鉴定 | 第49-50页 |
| ·目的基因的测序 | 第50-51页 |
| ·实时荧光PCR体系优化 | 第51-57页 |
| ·质粒浓度的计算 | 第51页 |
| ·通过对PCR体系的优化,在以下结果时扩增效率最高 | 第51-52页 |
| ·标准曲线的建立 | 第52-53页 |
| ·实时荧光PCR扩增的可重复性 | 第53-54页 |
| ·实时荧光PCR扩增的特异性 | 第54-55页 |
| ·实时荧光PCR扩增的敏感性 | 第55-56页 |
| ·对组织样品的检测: | 第56-57页 |
| 3 结论与讨论 | 第57-60页 |
| 全文总结 | 第60-61页 |
| 参考文献: | 第61-70页 |
| 英文摘要 | 第70-72页 |
| 硕士在读期间发表主要论文 | 第72页 |
