| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-19页 |
| 前言 | 第19-43页 |
| 1 蛋白激发子研究进展 | 第19-22页 |
| ·蛋白激发子的分类与作用特点 | 第19-20页 |
| ·过敏蛋白(Harpin) | 第20页 |
| ·隐地蛋白(Cryptogea) | 第20-21页 |
| ·植物激活蛋白(Activator) | 第21-22页 |
| 2 差异表达基因的筛选方法 | 第22-31页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第23-24页 |
| ·代表性差异分析法 | 第24-25页 |
| ·交互消减RNA差别显示技术 | 第25-26页 |
| ·抑制差减杂交技术(SSH)及其研究进展 | 第26-31页 |
| ·SSH技术的基本原理 | 第26页 |
| ·SSH技术的主要流程 | 第26-28页 |
| ·抑制消减杂交的优点和缺点 | 第28-30页 |
| ·SSH技术在植物上的研究进展 | 第30页 |
| ·抑制消减杂交的应用前景 | 第30-31页 |
| 3 双向电泳联用质谱技术的研究进展 | 第31-37页 |
| ·双向电泳的研究进展 | 第31-36页 |
| ·双向电泳的原理 | 第31页 |
| ·双向电泳的主要技术流程 | 第31-34页 |
| ·双向电泳在植物科学研究中的应用 | 第34-35页 |
| ·双向电泳的优缺点 | 第35-36页 |
| ·蛋白质的质谱分析技术 | 第36-37页 |
| ·双向电泳联用质谱技术前景 | 第37页 |
| 4 棉花对黄萎病的抗性机制 | 第37-41页 |
| ·棉花黄萎病病原 | 第37-38页 |
| ·传播途径和发病条件 | 第38页 |
| ·棉花对黄萎病抗性机制 | 第38-39页 |
| ·棉花黄萎病的致病机理 | 第39页 |
| ·抗黄萎病常规育种进展 | 第39-40页 |
| ·转基因抗黄萎病育种进展 | 第40-41页 |
| 5 研究的目的与意义 | 第41-43页 |
| 第一章 细极链格孢菌蛋白激发子对棉花生长发育的影响 | 第43-69页 |
| 第一节 细极链格孢菌蛋白激发子对棉花种子萌发及幼苗生长的影响 | 第44-50页 |
| 1 材料与方法 | 第44-45页 |
| ·材料与设计 | 第44页 |
| ·试验方法 | 第44-45页 |
| ·发芽势、发芽率的检测方法 | 第44页 |
| ·主要农艺性状的测量 | 第44-45页 |
| ·根系活力、MDA的测定 | 第45页 |
| ·试验统计方法 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-49页 |
| ·快速纸培发芽法测定PEAT对发芽率及生长的影响 | 第45-47页 |
| ·PEAT对发芽率的影响 | 第45-46页 |
| ·PEAT对根重的影响 | 第46页 |
| ·PEAT对根长的影响 | 第46-47页 |
| ·采用沙培发芽法测定蛋白激发子对发芽及生长的影响 | 第47-48页 |
| ·PEAT对发芽率的影响 | 第47页 |
| ·PEAT对苗高的影响 | 第47-48页 |
| ·PEAT对根系生理的影响 | 第48-49页 |
| ·对根系活力的影响 | 第48页 |
| ·对MDA含量的影响 | 第48-49页 |
| 3 小结与讨论 | 第49-50页 |
| 第二节 细极链格孢菌蛋白激发子对棉株田间促生效果评价及品质鉴定 | 第50-63页 |
| 1 材料与方法 | 第50-52页 |
| ·材料与设计 | 第50页 |
| ·主要农艺及经济性状的调查 | 第50页 |
| ·主要纤维品质性状的测定 | 第50页 |
| ·对棉光合特性指标的测定 | 第50-51页 |
| ·叶绿素(Ch1)含量 | 第50-51页 |
| ·光合效率 | 第51页 |
| ·分析方法 | 第51页 |
| ·纤维品质多目标综合值综合评价 | 第51页 |
| ·聚类分析 | 第51页 |
| ·试验统计方法 | 第51-52页 |
| 2 结果分析 | 第52-60页 |
| ·PEAT对棉株主要农艺性状及经济性状的影响 | 第52-55页 |
| ·PEAT对株高的影响 | 第52页 |
| ·PEAT对茎粗的影响 | 第52页 |
| ·PEAT对果枝台数的影响 | 第52-53页 |
| ·PEAT对成铃数的影响 | 第53页 |
| ·PEAT对吐絮率的测定 | 第53-54页 |
| ·PEAT对现蕾强度、成花率、成铃率的影响 | 第54页 |
| ·PEAT对主要经济性状的影响 | 第54-55页 |
| ·PEAT对籽/皮棉产量的影响 | 第55页 |
| ·PEAT对棉花纤维品质的影响 | 第55-57页 |
| ·对主要纤维品质主要指标的影响 | 第55-56页 |
| ·PEAT对纤维品质综合评价指标的研究 | 第56页 |
| ·PEAT对纤维品质性状的聚类分析 | 第56-57页 |
| ·PEAT对棉株光合特性的影响 | 第57-60页 |
| ·对叶绿素含量(Ch1)的影响 | 第57-58页 |
| ·PEAT对棉花光合速率(Pn)的影响 | 第58页 |
| ·PEAT对孔导度(Cond)的影响 | 第58-59页 |
| ·PEAT对蒸腾速率的影响(Ts) | 第59-60页 |
| ·PEAT对外界光合作用有效辐射的影响(PAR) | 第60页 |
| 3 小结与讨论 | 第60-63页 |
| ·PEAT对主要性状及产量的影响 | 第60-61页 |
| ·PEAT对纤维品质的影响 | 第61页 |
| ·PEAT对光合特性的影响 | 第61-63页 |
| 第三节 细极链格孢菌蛋白激发子对棉花生长相关酶的影响 | 第63-69页 |
| 1 材料与方法 | 第63-65页 |
| ·材料与试验设计 | 第63页 |
| ·取样与测定方法 | 第63-65页 |
| ·取样方法 | 第63页 |
| ·测定方法 | 第63-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-67页 |
| ·对MDA含量的影响 | 第65-66页 |
| ·对SOD的影响 | 第66页 |
| ·对POD的影响 | 第66页 |
| ·对NR的影响 | 第66-67页 |
| ·对碳氮比(C/N)的影响 | 第67页 |
| 3 小结与讨论 | 第67-69页 |
| 第二章 细极链格孢菌蛋白激发子诱导棉苗基因表达差减文库的构建及EST分析 | 第69-99页 |
| 1 研究材料与方法 | 第69-78页 |
| ·材料 | 第69-70页 |
| ·植物材料 | 第69页 |
| ·主要试剂 | 第69页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第69-70页 |
| ·技术路线 | 第70页 |
| ·试验方法 | 第70-78页 |
| ·棉花样品的处理 | 第70-71页 |
| ·棉花总RNA的提取 | 第71页 |
| ·mRNA的纯化 | 第71-72页 |
| ·SSH文库的构建 | 第72-78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-96页 |
| ·总RNA与mRNA质量检测 | 第78-79页 |
| ·SSH文库的构建 | 第79-81页 |
| ·Rsa Ⅰ酶切及接头效率的检测 | 第79-80页 |
| ·差减杂交PCR产物分析 | 第80页 |
| ·消减文库质量检测 | 第80-81页 |
| ·序列测定结果 | 第81页 |
| ·序列查询分析 | 第81-96页 |
| ·GenBank EST数据库比对 | 第81-89页 |
| ·功能注释 | 第89-96页 |
| 3 小结与讨论 | 第96-99页 |
| 第三章 双向电泳联用质谱技术研究棉苗对细菌链格孢菌蛋白激发子诱导的应答 | 第99-114页 |
| 1 研究材料与处理方法 | 第99-100页 |
| ·双向电泳基本技术体系 | 第99页 |
| ·植物材料 | 第99页 |
| ·仪器 | 第99-100页 |
| ·技术路线 | 第100页 |
| ·试剂 | 第100页 |
| 2 溶液的配制 | 第100-103页 |
| 3 试验方法 | 第103-106页 |
| ·棉花样品的处理 | 第103页 |
| ·叶片全蛋白的制备 | 第103页 |
| ·第一向等电聚焦 | 第103-104页 |
| ·第二向SDS-PAGE电泳 | 第104-105页 |
| ·剥胶、染色 | 第105页 |
| ·图象获取分析 | 第105-106页 |
| 4 质谱与生物信息学分析 | 第106页 |
| 5 结果与分析 | 第106-111页 |
| ·棉花双向电泳技术体系建立 | 第106-108页 |
| ·全蛋白提取方法的改进 | 第106-107页 |
| ·双向电泳条件的改进 | 第107-108页 |
| ·2-DE图谱特征 | 第108页 |
| ·蛋白图谱分析结果 | 第108-110页 |
| ·差异表达蛋白质的MALDI-TOF质谱分析与鉴定 | 第110-111页 |
| 6 小结与讨论 | 第111-114页 |
| 第四章 细极链格孢菌蛋白激发子对棉花黄萎病的防效机制及转基因研究 | 第114-136页 |
| 第一节 细极链格孢蛋白激发子诱导棉花抗病性及相关酶的变化 | 第115-122页 |
| 1 材料与方法 | 第115-118页 |
| ·材料 | 第115页 |
| ·化学试剂与仪器 | 第115页 |
| ·PEAT对黄萎病的诱抗效果 | 第115-117页 |
| ·棉花处理 | 第115-116页 |
| ·棉花黄萎病的复壮培养 | 第116页 |
| ·黄萎病孢子悬浮液的制备 | 第116页 |
| ·接种方法 | 第116-117页 |
| ·诱导抗病的生理生化机制研究 | 第117-118页 |
| ·材料处理 | 第117页 |
| ·取样方法 | 第117页 |
| ·过氧化物酶(POD)活性测定 | 第117页 |
| ·超氧物歧化酶(SOD)活力测定 | 第117页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定 | 第117页 |
| ·丙二醛(MDA)含量的测定 | 第117页 |
| ·多酚氧化酶(PPO)活性测定 | 第117页 |
| ·几丁质酶活性测定 | 第117-118页 |
| 2 结果与分析 | 第118-120页 |
| ·细极链格孢蛋白激发子PEAT对棉黄萎病的诱抗效果 | 第118页 |
| ·PEAT对抗性相关酶的影响 | 第118-120页 |
| ·PEAT对POD活性的影响 | 第118页 |
| ·PEAT对SOD活性的影响 | 第118-119页 |
| ·PEAT对PAL活性的影响 | 第119页 |
| ·PEAT对PPO活性的影响 | 第119-120页 |
| ·PEAT对几丁质酶活性的影响 | 第120页 |
| ·PEAT对丙二醛(MDA)含量的影响 | 第120页 |
| 3 讨论与小结 | 第120-122页 |
| 第二节 转基因表达载体的构建与棉花的遗传转化研究 | 第122-136页 |
| 1 材料与方法 | 第122-130页 |
| ·材料 | 第122-123页 |
| ·质粒载体与菌株 | 第122页 |
| ·植物材料 | 第122页 |
| ·主要化学试剂与试剂盒 | 第122-123页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第123页 |
| ·试验方法 | 第123-126页 |
| ·PBI121—pemg~1植物表达载体的构建 | 第123-124页 |
| ·PCAMBIA—pem~(g1)植物表达载体的构建 | 第124-126页 |
| ·PCR产物与酶切产物的纯化与回收 | 第126页 |
| ·连接 | 第126-127页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5@感受态细胞 | 第127页 |
| ·阳性克隆的确定 | 第127页 |
| ·菌液PCR法确定载体中插入片断 | 第127页 |
| ·载体提取法确定载体中插入片断(质粒DNA的提取) | 第127页 |
| ·序列测定 | 第127-128页 |
| ·导入质粒DNA的大量制备 | 第128页 |
| ·花粉管通道法进行导入(花粉管通道法操作规程) | 第128-129页 |
| ·转基因植株的Kan与bar筛选 | 第129页 |
| ·转基因植株的Kan筛选 | 第129页 |
| ·转基因植株的bar~R筛选 | 第129页 |
| ·转基因植株分子生物学检测 | 第129-130页 |
| ·DNA提取 | 第129-130页 |
| ·PCR扩增(目的基因整合检测) | 第130页 |
| 2 结果分析 | 第130-135页 |
| ·目的基因的序列 | 第130页 |
| ·表达载体pBI121—pem~(g1)的制备 | 第130-132页 |
| ·目的片段的制备 | 第130-131页 |
| ·酶切 | 第131页 |
| ·重组质粒的PCR检测 | 第131-132页 |
| ·植物表达载体PCAMBIA-pem~(g1)的构建 | 第132-133页 |
| ·目的片段的制备 | 第132页 |
| ·酶切 | 第132-133页 |
| ·植物表达载体构建的PCR检测 | 第133页 |
| ·转化结果 | 第133-134页 |
| ·转基因植株的Kan与bar~R筛选 | 第134页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第134-135页 |
| 3 小结与讨论 | 第135-136页 |
| 全文总结 | 第136-140页 |
| 参考文献 | 第140-154页 |
| 致谢 | 第154-155页 |
| 作者简介 | 第155页 |
