黄瓜花叶病毒M株系侵染性cDNA克隆的构建及3a基因的原核表达
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-19页 |
| ·黄瓜花叶病毒的研究进展 | 第9-12页 |
| ·症状表现 | 第9页 |
| ·株系划分 | 第9页 |
| ·基因组结构 | 第9-10页 |
| ·黄瓜花叶病毒国内外研究进展 | 第10-11页 |
| ·黄瓜花叶病毒M株系国内外研究概述 | 第11-12页 |
| ·侵染性克隆的研究进展 | 第12-18页 |
| ·侵染性病毒研究进展 | 第12页 |
| ·侵染性克隆与病毒分子生物学 | 第12-13页 |
| ·侵染性克隆的种类 | 第13页 |
| ·侵染性克隆构建的策略 | 第13-17页 |
| ·侵染性转录物的产生 | 第14-15页 |
| ·侵染性克隆的产生与鉴定 | 第15-16页 |
| ·影响体外转录物侵染性的因素 | 第16-17页 |
| ·侵染性cDNA克隆的应用 | 第17-18页 |
| ·病毒基因功能的研究 | 第17页 |
| ·新型疫苗的研究 | 第17页 |
| ·RNA病毒作为载体表达外源基因编码的蛋白 | 第17-18页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-28页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·毒原的采集及保存 | 第19页 |
| ·接种方式 | 第19页 |
| ·菌株和质粒 | 第19页 |
| ·生化及分子生物学试剂 | 第19页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-28页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第20页 |
| ·RT-PCR | 第20-21页 |
| ·反转录反应 | 第20-21页 |
| ·PCR扩增 | 第21页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第21页 |
| ·连接反应 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第23页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA | 第23页 |
| ·序列分析 | 第23-24页 |
| ·全序列cDNA重组载体的构建 | 第24页 |
| ·体外转录 | 第24页 |
| ·摩擦接种及症状观察 | 第24-25页 |
| ·含CMV-M-3a基因的原核表达载体的构建 | 第25页 |
| ·CMV-M-3a基因的诱导表达 | 第25页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第25-28页 |
| ·样品的制备 | 第25-26页 |
| ·SDS-PAGE | 第26页 |
| ·Western blot分析 | 第26-27页 |
| ·融合蛋白的切胶回收 | 第27-28页 |
| 3 结果及分析 | 第28-43页 |
| ·CMV-M侵染现象的观察结果 | 第28-29页 |
| ·CMV-M的基组全序列及分析 | 第29-38页 |
| ·CMV-M基因组全序列PCR的扩增 | 第29页 |
| ·CMV-M基因组核苷酸全序列分析 | 第29-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| ·CMV-M侵染性cDNA克隆的构建及侵染性检测 | 第38-40页 |
| ·CMV-M全序列cDNA克隆的构建 | 第38页 |
| ·体外转录和摩擦接种 | 第38页 |
| ·体外转录物侵染性的RT-PCR检测 | 第38-40页 |
| ·讨论 | 第40页 |
| ·3a Gene的原核表达 | 第40-43页 |
| ·3a基因片断的PCR扩增 | 第41页 |
| ·pET22b-MP重组表达载体的构建 | 第41页 |
| ·融合蛋白表达的检测 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 5 结论与展望 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
