| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-33页 |
| 1 棉纤维细胞发育的过程 | 第13-16页 |
| ·起始期(纤维原始细胞分化和突起) | 第14页 |
| ·伸长期(纤维细胞伸长和初生壁合成) | 第14-15页 |
| ·增厚期(纤维细胞的次生壁合成和增厚) | 第15页 |
| ·成熟期(脱水成熟) | 第15-16页 |
| 2 棉纤维细胞发育相关基因的研究进展 | 第16-17页 |
| 3 基因克隆技术的研究和进展 | 第17-24页 |
| ·序列克隆 | 第17-18页 |
| ·根据已知基因的序列 | 第17-18页 |
| ·根据DNA测序结果 | 第18页 |
| ·差异表达分析 | 第18-20页 |
| ·差示筛选 | 第18-19页 |
| ·mRNA差异显示 | 第19页 |
| ·抑制消减杂交 | 第19-20页 |
| ·染色体步移技术 | 第20-21页 |
| ·基因组文库 | 第20页 |
| ·接头连接PCR(ligation—mediated PCR) | 第20-21页 |
| ·反向PCR(Reverse—PCR) | 第21页 |
| ·随机引物PCR | 第21页 |
| ·图位克隆 | 第21-22页 |
| ·转座子或T-DNA标签法 | 第22页 |
| ·功能克隆 | 第22-23页 |
| ·根据基因表达的蛋白质 | 第22页 |
| ·根据基因的表型突变互补功能 | 第22-23页 |
| ·酵母双杂交 | 第23页 |
| ·cDNA微阵列(cDNA Array)分析 | 第23-24页 |
| ·问题与展望 | 第24页 |
| 4 RNA干扰技术简介 | 第24-26页 |
| ·RNA干扰的发现 | 第24-25页 |
| ·RNA干扰的作用机制 | 第25页 |
| ·RNA干扰的优点和不足 | 第25-26页 |
| 5 实时荧光定量PCR技术简介 | 第26-29页 |
| ·目前常用的实时荧光定量PCR技术 | 第27页 |
| ·实时定量PCR应用中的问题及优化方案 | 第27-29页 |
| ·引物二聚体 | 第27页 |
| ·管家基因 | 第27-28页 |
| ·标准曲线 | 第28页 |
| ·比较阈值法 | 第28页 |
| ·循环数 | 第28页 |
| ·Mg~(2+)的浓度 | 第28-29页 |
| ·引物的浓度 | 第29页 |
| ·模板的浓度 | 第29页 |
| 6 本研究中克隆的两个基因的分子研究进展 | 第29-33页 |
| ·水通道蛋白(aquaporin,AQP)研究进展 | 第29-30页 |
| ·小泡相关膜蛋白(Vesicle-Associated Membrane Protein VAMP)研究进展 | 第30-33页 |
| 第二部分 研究报告 | 第33-82页 |
| 前言 | 第33页 |
| 1 试验材料 | 第33-37页 |
| ·植物材料 | 第33-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第34页 |
| ·酶、试剂及培养基 | 第34-35页 |
| ·引物 | 第35-37页 |
| 2 方法 | 第37-48页 |
| ·感受态细胞的制备及大肠杆菌的转化 | 第37页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第37页 |
| ·unigene的获得及序列分析 | 第37-38页 |
| ·棉花总RNA的提取及DNaseI消化 | 第38-41页 |
| ·改进的热硼酸法 | 第38-40页 |
| ·实验前准备 | 第38-39页 |
| ·实验步骤 | 第39-40页 |
| ·CTAB-酸酚法 | 第40页 |
| ·DNaseI消化 | 第40-41页 |
| ·甲醛-琼脂糖凝胶电泳 | 第41-42页 |
| ·准备工作 | 第41-42页 |
| ·实验步骤 | 第42页 |
| ·RT-PCR分析 | 第42-43页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第42页 |
| ·RT-PCR | 第42-43页 |
| ·棉花基因组DNA的提取方法 | 第43-44页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·GhAQP的35S启动子正义融合蛋白载体的构建 | 第44-45页 |
| ·GhAQP和GhVAMP的35S启动子反义载体的构建 | 第45-46页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第46-48页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·模板制备 | 第46-47页 |
| ·荧光定量PCR体系与反应程序 | 第47页 |
| ·比较Ct法分析基因的表达量 | 第47-48页 |
| 3 结果与讨论 | 第48-82页 |
| ·GhAQP基因的克隆与研究 | 第48-66页 |
| ·序列分析 | 第48-58页 |
| ·全长基因的分离 | 第48-49页 |
| ·GhAQP氨基酸序列的分析 | 第49-52页 |
| ·GhAQP氨基酸序列的三维结构预 | 第52-55页 |
| ·棉花GhAQP与其它作物中同源基因的比较分析 | 第55-58页 |
| ·表达分析 | 第58-62页 |
| ·GhAQP的RT-PCR分析 | 第58页 |
| ·GhAQP的实时荧光定量PCR分析 | 第58-62页 |
| ·融合蛋白正义表达载体的构建 | 第62-64页 |
| ·载体构建的思路 | 第62页 |
| ·载体构建的验证 | 第62-64页 |
| ·植物反义表达载体的构建 | 第64-66页 |
| ·载体构建的思路 | 第64页 |
| ·载体构建的验证 | 第64-66页 |
| ·GhVAMP基因的克隆和研究 | 第66-79页 |
| ·序列分析 | 第66-73页 |
| ·部分全长基因的分离 | 第66-67页 |
| ·GhVAMP氨基酸序列的分析 | 第67-71页 |
| ·棉花GhVAMP与其它作物中同源基因的比较分析 | 第71-73页 |
| ·表达分析 | 第73-77页 |
| ·GhVAMP的RT-PCR分析 | 第73页 |
| ·GhVAMP的实时荧光定量PCR分析 | 第73-77页 |
| ·植物反义表达载体的构建 | 第77-79页 |
| ·载体构建的思路 | 第77页 |
| ·载体构建的验证 | 第77-79页 |
| ·讨论 | 第79-82页 |
| 全文结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
