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水稻Bel基因的克隆、表达特性分析及对烟草的转化

摘要第1-4页
ABSTRACT第4-7页
第1章 文献综述第7-26页
   ·水稻苯达松敏感致死突变的研究第7-11页
     ·选择性除草剂苯达松第7页
     ·水稻苯达松敏感致死突变材料及其性状第7-8页
     ·水稻苯达松敏感致死基因的遗传学研究第8页
     ·水稻苯达松敏感致死基因的分子标记定位及相关研究第8-9页
     ·水稻对苯达松的解毒过程及苯达松敏感致死的分子机理第9-11页
   ·P450与除草剂抗性植物第11-26页
     ·P450的概述第11-19页
       ·P450的发现、起源及其分类第11-13页
       ·P450的蛋白结构分析及催化机理第13-16页
       ·P450的基因结构及功能分析第16-17页
       ·P450的表达调控特性第17-18页
       ·植物P450基因的克隆第18-19页
     ·P450与除草剂代谢第19-26页
       ·除草剂代谢的作用机制第19页
       ·P450催化除草剂代谢的反应类型第19-20页
       ·抗除草剂P450基因的克隆与植物转基因第20-26页
第2章 材料与方法第26-35页
   ·实验材料第26-27页
   ·实验方法第27-35页
     ·水稻Bel基因的克隆及序列分析第27-30页
       ·水稻叶片基因组DNA的提取第27页
       ·水稻叶片RNA的提取第27-28页
       ·对提取的RNA进行逆转录第28页
       ·Bel基因cDNA编码区的获得第28-29页
       ·T载体的连接与重组质粒的转化第29页
       ·质粒DNA的提取与酶切鉴定第29-30页
     ·半定量RT-PCR研究Bel表达的特性第30-31页
       ·半定量RT-PCR反应中循环次数的确定第30页
       ·Bel基因表达特性研究第30-31页
     ·水稻Bel基因的转基因烟草构建与分析第31-35页
       ·农杆菌的质粒提取第31页
       ·表达载体的构建第31-32页
       ·质粒向细菌的转化及酶切鉴定第32页
       ·农杆菌感受态细胞的制备第32页
       ·质粒的农杆菌转化及酶切鉴定第32页
       ·烟草转化第32-33页
       ·烟草DNA的小量提取第33-34页
       ·转基因烟草的检测第34页
       ·转基因烟草的苯达松抗性实验第34-35页
第3章 结果与分析第35-50页
   ·利用生物信息学手段对BEL基因的分析第35-40页
     ·Bel区段的基因预测第35-36页
     ·Bel基因结构的分析第36-38页
     ·保守性结构域、基序,蛋白质家族分析第38-40页
       ·NCBI上保守结构域的查找第38页
       ·Pfam上保守结构域的查找第38-39页
       ·Scanprosite对蛋白质家族和结构域的查找第39-40页
   ·BEL基因的克隆第40-45页
     ·水稻DNA及RNA的提取第40页
     ·Bel基因编码区(CDS)的克隆第40-41页
     ·T载体连接转化及序列分析第41-43页
     ·Bel基因与其它具有除草剂抗性的P450基因的序列分析第43-45页
   ·BEL基因表达特性的研究第45-47页
     ·半定量RT-PCR指数扩增循环次数的确定第45-46页
     ·Bel基因表达特性研究第46-47页
   ·BEL基因的烟草转基因研究第47-50页
     ·表达载体pKYL71-Bel的构建第47页
     ·转基因烟草的培育第47-48页
     ·转基因烟草的PCR鉴定第48页
     ·转基因烟草的苯达松检测第48-50页
第4章 讨论第50-54页
   ·BEL基因突变的分子机理的分析第50-51页
   ·定量RT-PCR的思考第51-52页
   ·BEL基因与抗除草剂P450第52-54页
致谢第54-55页
参考文献第55-61页
攻读学位期间的研究成果第61页

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