| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 日本脑炎病毒的分子生物学研究进展 | 第13-19页 |
| ·JEV 的分类及分型 | 第13-14页 |
| ·JEV 分子生物学 | 第14-19页 |
| ·JEV 的基因组特征 | 第14页 |
| ·JEV 的结构蛋白 | 第14-17页 |
| ·JEV 的非结构蛋白 | 第17-18页 |
| ·JEV 基因组RNA5'末端和3'末端非翻译区的结构和功能 | 第18-19页 |
| 第二章 长链RT-PCR 技术研究概况 | 第19-25页 |
| ·逆转录（Reverse Transcription） | 第19-20页 |
| ·RNA 质量和数量 | 第19页 |
| ·逆转录酶 | 第19-20页 |
| ·反转录产物处理 | 第20页 |
| ·长链PCR 原理 | 第20-22页 |
| ·长链PCR 反应条件的优化 | 第20页 |
| ·DNA 聚合酶 | 第20-21页 |
| ·引物 | 第21页 |
| ·缓冲液 | 第21页 |
| ·Mg2+ | 第21页 |
| ·循环条件 | 第21-22页 |
| ·添加剂 | 第22页 |
| ·其它因素 | 第22页 |
| ·长链RT-PCR 技术应用 | 第22-23页 |
| ·感染性克隆的构建 | 第22-23页 |
| ·微生物基因组研究 | 第23页 |
| ·基因检测 | 第23页 |
| ·展望 | 第23-25页 |
| 第三章 JEV/WHe 株全基因组序列特征分析 | 第25-39页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·主要质粒、菌株和毒株 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·病毒增殖 | 第25-26页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·RNA 提取 | 第26-27页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第27页 |
| ·目的片段的回收 | 第27页 |
| ·感受态细胞与LB 培养基制作 | 第27页 |
| ·目的片段的克隆、转化及重组质粒的筛选与鉴定 | 第27-28页 |
| ·测序结果分析 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-35页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第28页 |
| ·WHe 株基因组全长cDNA 的克隆及核苷酸与氨基酸序列分析 | 第28页 |
| ·WHe 株进化分析 | 第28-31页 |
| ·WHe 株UTR 二级结构的预测与分析 | 第31-35页 |
| ·E 基因及其氨基酸序列分析 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第四章 JEV/WHe 株全长cDNA 的长链RT-PCR 法扩增 | 第39-45页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·毒株、质粒、菌种、试验动物 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-42页 |
| ·引物设计 | 第40-41页 |
| ·JEV WHe 株RNA 的提取 | 第41页 |
| ·JEV WHe 株RNA 的RT-PCR 反应 | 第41页 |
| ·JEV WHe 株cDNA 的PCR 鉴定 | 第41页 |
| ·JEV WHe 株cDNA 测序结果分析 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-43页 |
| ·长链PCR 最佳反应体系和扩增参数的建立 | 第42页 |
| ·JEV WHe 株全基因组cDNA 的扩增 | 第42页 |
| ·JEV 基因组全长cDNA 的鉴定 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第五章 JEV/WHe 株prME 和N51 基因的克隆及其DNA 疫苗载体的构建 | 第45-55页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·主要质粒与菌株 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-49页 |
| ·引物设计 | 第46-47页 |
| ·PCR 反应 | 第47页 |
| ·目的片段的回收 | 第47页 |
| ·感受态细胞与LB 培养基制作 | 第47页 |
| ·扩增片段的克隆与转化 | 第47页 |
| ·重组质粒筛选与鉴定 | 第47页 |
| ·重组质粒的序列测定与分析 | 第47页 |
| ·测序结果分析 | 第47页 |
| ·DNA 疫苗载体pVAX1-prME 和pVAX1-N51 的构建 | 第47-48页 |
| ·prME 和 N51 基因的回收与纯化 | 第48页 |
| ·pVAX1 质粒的大量制备 | 第48页 |
| ·目的基因的克隆与转化 | 第48-49页 |
| ·pVAX1-prME 和pVAX1-N51 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第49页 |
| ·重组质粒的序列测定与分析 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-50页 |
| ·prME 和NS1 基因的PCR 扩增 | 第49页 |
| ·prME 和NS1 基因的克隆与鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组DNA 疫苗载体pVAX1-prME 和pVAX1-NS1 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第50页 |
| ·重组DNA 疫苗载体pVAX1-prME 和pVAX1-NS1 序列测定与分析 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 第六章 JEV /WHe 株N51 基因在大肠杆菌中的高效表达 | 第55-59页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·NS1 基因的克隆与回收 | 第55页 |
| ·原核表达质粒的构建及鉴定 | 第55-56页 |
| ·细菌的培养与诱导表达 | 第56页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-58页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第57页 |
| ·诱导表达产物的SDS- PAGE 电泳检测 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录Ⅰ（缩略词） | 第69-71页 |
| 附录Ⅱ（本文所引用的JEV 分离毒株） | 第71-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
