| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| ·结构生物学概述 | 第11-12页 |
| ·表观遗传学概述 | 第12-13页 |
| ·植物表观遗传学概述 | 第13-14页 |
| ·DNA 甲基化 | 第13页 |
| ·组蛋白共价修饰 | 第13页 |
| ·RNA 介导的基因沉默 | 第13页 |
| ·副突变 | 第13-14页 |
| ·染色质重塑 | 第14页 |
| ·研究植物表观遗传学的意义 | 第14页 |
| ·TUDOR 结构域的研究背景和意义 | 第14-16页 |
| ·研究现状 | 第16页 |
| ·本课题研究的内容和目标 | 第16-20页 |
| ·SPIN 基因的亚克隆：原核表达载体的构建、筛选、鉴定 | 第17页 |
| ·构建成功的SPIN基因原核表达载体的转化和表达 | 第17页 |
| ·SPINDLIN1 的纯化 | 第17-18页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物的结晶条件筛选与优化 | 第18页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物晶体的衍射数据收集与结构解析 | 第18页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物的结构信息 | 第18页 |
| ·生物大分子相互作用实验BIA-CORE | 第18-19页 |
| ·课题小结 | 第19-20页 |
| 2 实验材料与方法 | 第20-32页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·SPIN 基因的表达载体 | 第20页 |
| ·分别用于载体扩增和基因表达的宿主菌 | 第20页 |
| ·用于纯化与结晶实验的蛋白质材料 | 第20-21页 |
| ·用于衍射实验的晶体 | 第21页 |
| ·实验试剂与药品 | 第21-22页 |
| ·SPIN 基因的亚克隆构建 | 第21页 |
| ·SPINDLIN1 的表达 | 第21页 |
| ·SPINDLIN1 的纯化 | 第21-22页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物的结晶实验 | 第22页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物晶体的衍射实验 | 第22页 |
| ·BIA-CORE实验 | 第22页 |
| ·实验设备与器材 | 第22-24页 |
| ·SPIN 基因的亚克隆 | 第22页 |
| ·SPINDLIN1 的表达 | 第22-23页 |
| ·SPINDLIN1 的纯化 | 第23页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物的结晶实验 | 第23页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物晶体的衍射实验 | 第23-24页 |
| ·BIA-CORE实验 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-32页 |
| ·SPIN 基因从 PET30A载体构建到PET28A/SUMO 载体的亚克隆 | 第24-26页 |
| ·SPINDLIN1 在大肠杆菌 BL21(DE3)菌株中的试表达 | 第26-27页 |
| ·SPINDLIN1 的大规模表达 | 第27页 |
| ·SPINDLIN1 的纯化 | 第27-29页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物的结晶实验 | 第29-31页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物晶体的衍射实验 | 第31页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物晶体的衍射数据收集 | 第31-32页 |
| ·结构解析 | 第32页 |
| ·BIA-CORE实验 | 第32页 |
| 3 实验结果与分析 | 第32-43页 |
| ·SPINDLIN1 的纯化 | 第32-36页 |
| ·PET28A | 第32-33页 |
| ·PGEX-2T-SPIN载体表达的SPINDLIN1 的配体 GST 亲和层析 | 第33页 |
| ·PET28A/SUMO-SPIN载体表达的SPINDLIN1 的阴离子交换层析 | 第33-34页 |
| ·PGEX-2T-SPIN载体表达的SPINDLIN1 的阴离子交换层析 | 第34-35页 |
| ·分离掉纯化标签的SPINDLIN1 的凝胶过滤层析 | 第35页 |
| ·纯化后得到用于的结晶SPINDLIN1（稀释5 倍） | 第35-36页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物晶体初筛的结晶现象 | 第36-38页 |
| ·SPINDLIN1 分别与两种底物形成的复合物的结晶现象 | 第36-37页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物优化后的结晶现象 | 第37-38页 |
| ·以H3K4ME3 为底物的复合物晶体的衍射图样 | 第38-39页 |
| ·SPINDLIN1-组蛋白多肽复合物晶体结构的解析结果 | 第39-42页 |
| ·全貌 | 第39页 |
| ·SPINDLIN1 与组蛋白多肽 H3K4ME3 相互作用的微环境 | 第39-42页 |
| ·BIA-CORE 实验结果证明二者作用力非常稳定，特异性非常高 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| ·SPINDLIN1 的性质与功能 | 第43-44页 |
| ·复合物晶体的性质 | 第44页 |
| ·复合物晶体的衍射 | 第44页 |
| ·复合物晶体结构的不完整性 | 第44页 |
| ·本课题与植物表观遗传学研究的关系 | 第44-45页 |
| 5 结论 | 第45-47页 |
| ·重组目的蛋白的获得 | 第45页 |
| ·目的蛋白的纯化策略 | 第45页 |
| ·适于衍射的晶体的获得 | 第45页 |
| ·晶体结构的解析 | 第45页 |
| ·SPINDLIN1 与组蛋白多肽 H3K4ME3 相互作用的方式 | 第45-46页 |
| ·生物大分子的相互作用 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
