| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 第一部分 前言 | 第8-20页 |
| ·抗精子避孕疫苗的研究进展 | 第8-10页 |
| ·避孕疫苗的研究进展 | 第8-9页 |
| ·抗精子避孕疫苗的研究进展 | 第9-10页 |
| ·精子特异的膜蛋白-Catsper1 | 第10-15页 |
| ·CatSper1的结构 | 第11-12页 |
| l.2.2 CatSper1的表达部位 | 第12页 |
| ·CatSper1的生物学功能 | 第12-13页 |
| ·CatSper1影响精子运动可能的作用机理 | 第13-14页 |
| ·S CatSper1家族的其他成员 | 第14-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统概述 | 第15-18页 |
| ·本研究课题的目的及意义 | 第18-19页 |
| ·本研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 第二部分 实验材料、试剂和仪器 | 第20-22页 |
| ·主要材料 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| 第三部分 实验方法 | 第22-35页 |
| ·提取 RNA和 RT-PCR得到目的基因片段 | 第22-25页 |
| ·小鼠睾丸精子总RNA的提取 | 第22页 |
| ·RT-PCR得到目的基因片段 | 第22-24页 |
| ·二次PCR扩增 | 第24页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的构建 | 第25-30页 |
| ·载体pPICZαA的制备 | 第25-26页 |
| ·目的基因片段与载体的双酶切 | 第26-27页 |
| ·外源基因与载体的连接 | 第27页 |
| ·氯化钙法制备大肠杆菌 DH5α感受态细胞 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌 DH5α转化 | 第28页 |
| ·转化子的筛选和鉴定 | 第28-30页 |
| ·Catsper1_(S1-S6)在毕赤酵母中的表达 | 第30-35页 |
| ·酵母细胞的转化 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆的筛选与表达蛋白的鉴定 | 第31-33页 |
| ·目的蛋白的鉴定、分析 | 第33-35页 |
| 第四部分 实验结果 | 第35-41页 |
| ·小鼠睾丸精子总 RNA的提取 | 第35页 |
| ·RT-PCR法获得目的基因片段 | 第35-36页 |
| ·目的基因片段和载体 pPICZαA双酶切 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·快速 PCR法鉴定重组质粒 | 第37页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒 | 第37-38页 |
| ·测序鉴定 | 第38页 |
| ·Sac I单酶切重组质粒 | 第38-39页 |
| ·GS115转化子的PCR鉴定 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE和 Western blotting分析鉴定重组 Catsper1_(S1-S6) | 第39-41页 |
| 第五部分 讨论 | 第41-45页 |
| 第六部分 小结 | 第45-46页 |
| 第七部分 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录一 各种试剂的配制方法 | 第51-55页 |
| 1. 各种培养液(平板)配方 | 第51页 |
| 2. SDS-PAGE电泳试剂配方 | 第51-52页 |
| 3. Western blotting各种试剂配方 | 第52-53页 |
| 4. 琼脂糖凝胶电泳试剂配方 | 第53页 |
| 5. 抽提质粒试剂配方 | 第53-55页 |
| 附录二 重组质粒 Catsper1_(S1-S6)的测序结果 | 第55-56页 |
| 附录三 小鼠CatSper1基因序列 | 第56-57页 |
| 附录四 表达载体pPICZαA多克隆位点基因序列 | 第57-58页 |
| 附录五 缩略词 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
