| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第13-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-45页 |
| ·减毒沙门氏菌疫苗的研究进展 | 第14-22页 |
| ·经典的沙门氏菌疫苗 | 第14-16页 |
| ·新型沙门氏菌减毒疫苗 | 第16-21页 |
| ·想的减毒疫苗 | 第21-22页 |
| ·减毒沙门氏菌载体的研究进展 | 第22-34页 |
| ·减毒沙门氏菌载体的优点 | 第22-23页 |
| ·减毒沙门氏菌载体的缺点与解决方法 | 第23-29页 |
| ·选择标记的使用 | 第29-30页 |
| ·DNA疫苗载体 | 第30-32页 |
| ·减毒沙门氏菌载体在国内的应用 | 第32-34页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌的危害与防制 | 第34-38页 |
| ·病原学 | 第34-35页 |
| ·流行病学 | 第35页 |
| ·发病机制 | 第35页 |
| ·临床症状 | 第35-36页 |
| ·病理变化 | 第36-37页 |
| ·诊断 | 第37页 |
| ·预防措施 | 第37-38页 |
| ·治疗 | 第38页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌疫苗及载体的研究进展 | 第38-45页 |
| ·国外研究进展 | 第39-43页 |
| ·国内研究进展 | 第43-45页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第45-47页 |
| 第3章 材料与方法 | 第47-65页 |
| ·实验材料 | 第47-54页 |
| ·质粒、菌株和培养条件 | 第47-50页 |
| ·工具酶和试剂 | 第50页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第50页 |
| ·缓冲液 | 第50-52页 |
| ·细菌基因组DNA提取试剂 | 第52-53页 |
| ·实验动物 | 第53页 |
| ·引物 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-65页 |
| ·沙门氏菌基因组DNA提取 | 第54页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第54页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第54页 |
| ·连接产物的转化 | 第54-55页 |
| ·重组质粒的快速鉴定 | 第55页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第55页 |
| ·质粒的制备 | 第55-56页 |
| ·沙门氏菌电转化 | 第56-57页 |
| ·沙门氏菌ELISA检测方法的建立 | 第57页 |
| ·大肠杆菌原核表达 | 第57-60页 |
| ·沙门氏菌属的PCR鉴定 | 第60页 |
| ·猪霍乱沙门氏菌C500株crp及asd基因的克隆与鉴定 | 第60页 |
| ·重组自杀性质粒pREcrp、pREcrpgfp、pREasd的构建 | 第60-61页 |
| ·接合转移与C500crp~-、C500crp~-/gfp~+、C500crp~-/asd、C500crp~-/gfp~+/asd、C500asd缺失株的筛选鉴定 | 第61-62页 |
| ·C500crp~-缺失株生物学特性鉴定 | 第62页 |
| ·C500crp~-缺失株对小鼠的免疫试验 | 第62页 |
| ·C500crp~-缺失株对小鼠的攻毒保护试验 | 第62-63页 |
| ·绿荧光蛋白基因gfp在沙门氏菌中的表达 | 第63页 |
| ·致水肿病大肠杆菌水肿毒素B亚基(SLT-Ⅱ vB)在C500crp~-/asd缺失株中的表达 | 第63-65页 |
| 第4章 结果与分析 | 第65-90页 |
| ·crp、asd基因的克隆与序列分析 | 第65-68页 |
| ·crp基因的克隆与序列分析 | 第65-66页 |
| ·asd基因的克隆与序列分析 | 第66-68页 |
| ·重组自杀性质粒pREcrp、pREcrpgfp、pREasd的构建 | 第68-73页 |
| ·重组自杀性质粒pREcrp的构建 | 第68-70页 |
| ·重组自杀性质粒pREcrpgfp的构建 | 第70-71页 |
| ·重组自杀性质粒pREasd的构建 | 第71-73页 |
| ·C500crp~-、C500crp~-/gfp~+、C500crp~-/asar、C500crp~-/gfp~+/asar、C500asd缺失株的筛选与鉴定 | 第73-77页 |
| ·C500crp~-缺失株的筛选与鉴定 | 第73-75页 |
| ·C500crp~-/gfp~+缺失株的筛选与鉴定 | 第75-76页 |
| ·C500crp~-/asd、C500crp~-/gfp~+/asd、C500asd缺失株的筛选与鉴定 | 第76-77页 |
| ·C500crp~-缺失株生物学特性鉴定 | 第77-80页 |
| ·C500crp~-缺失株表型鉴定 | 第77-78页 |
| ·C500crp~-缺失株生长特征鉴定 | 第78-79页 |
| ·C500crp~-缺失株对小鼠的毒力试验 | 第79-80页 |
| ·C500crp~-缺失株对小鼠的免疫试验 | 第80-81页 |
| ·C500crp~-缺失株对小鼠的保护试验 | 第81-82页 |
| ·gfp在C500及C500crp~-/asd缺失株中的表达 | 第82-84页 |
| ·gfp的克隆 | 第82-83页 |
| ·gfp在C500及C500crp~-/asd缺失株中的表达 | 第83-84页 |
| ·SLT-Ⅱ vB在C500crp~-/asd缺失株中的表达 | 第84-90页 |
| ·SLT-Ⅱ vB的克隆 | 第84-86页 |
| ·SLT-Ⅱ vB在C500crp~-/asd缺失株中的表达 | 第86页 |
| ·重组菌C500crp~-/asd (pYASLTⅡB)对小鼠的免疫试验 | 第86-87页 |
| ·重组菌C500crp~-/asd (pYASLTⅡB)诱导小鼠的DTH反应 | 第87-88页 |
| ·重组菌C500crp~-/asd (pYASLⅡIB)诱导小鼠的免疫保护反应 | 第88-90页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第90-97页 |
| ·crp缺失对毒力及免疫原性的影响 | 第90-91页 |
| ·重组自杀性质粒介导基因整合的筛选鉴定 | 第91-92页 |
| ·外源基因在C500crp~-/gfp~+缺失株染色体中的表达效率 | 第92页 |
| ·gfp基因在C500crp~-/asd缺失株平衡致死系统中的表达 | 第92-93页 |
| ·SLT-Ⅱ vB基因在C500crp~-/asd缺失株平衡致死系统中的表达 | 第93-94页 |
| ·重组菌C500crp~-/asd (pYASLTⅡB)对小鼠的免疫试验 | 第94-95页 |
| ·结论 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
