苹果L-半乳糖脱氢酶基因全长cDNA的克隆及正、反义表达载体的构建
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| ·维生素C 的发现以及意义 | 第10页 |
| ·高等植物中ASA 的功能、合成、运输和代谢 | 第10-16页 |
| ·高等植物中AsA 的生理功能 | 第10-12页 |
| ·AsA 在植物体的抗氧化系统中起着重要的作用 | 第10-11页 |
| ·AsA 在光合作用和光合保护中起重要作用 | 第11页 |
| ·AsA 在细胞壁代谢和细胞膨大中的作用 | 第11-12页 |
| ·AsA 对细胞分裂的影响 | 第12页 |
| ·AsA 可作为一系列重要酶反应的辅因子 | 第12页 |
| ·AsA 在植物信号传递过程中起重要作用 | 第12页 |
| ·高等植物中AsA 的合成途径 | 第12-14页 |
| ·碳链倒位途径 | 第12-13页 |
| ·邻酮醛糖途径 | 第13页 |
| ·L-半乳糖途径 | 第13页 |
| ·可能的交替途径：糖醛酸转变途径 | 第13-14页 |
| ·AsA 在植物细胞内的运输和代谢 | 第14-15页 |
| ·植物细胞内AsA 的跨膜运输 | 第14-15页 |
| ·AsA 在植物细胞内的氧化还原过程 | 第15页 |
| ·植物体内AsA 的分解 | 第15页 |
| ·影响AsA 积累的因素及调控措施 | 第15-16页 |
| ·影响AsA 积累的因素 | 第15-16页 |
| ·调控措施 | 第16页 |
| ·调控高等植物ASA 合成及代谢循环的相关酶 | 第16-18页 |
| ·AsA 合成相关酶 | 第16-17页 |
| ·磷酸甘露糖异构酶 | 第16页 |
| ·磷酸甘露糖变位酶 | 第16页 |
| ·GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶 | 第16页 |
| ·GDP-D-甘露糖-3,5-表异构酶 | 第16页 |
| ·L-半乳糖脱氢酶 | 第16-17页 |
| ·L-半乳糖内酯脱氢酶 | 第17页 |
| ·D-半乳糖醛酸还原酶 | 第17页 |
| ·AsA 代谢循环酶 | 第17-18页 |
| ·抗坏血酸氧化酶 | 第17页 |
| ·抗坏血酸过氧化物酶 | 第17-18页 |
| ·单脱氢抗坏血酸还原酶 | 第18页 |
| ·脱氢抗坏血酸还原酶 | 第18页 |
| ·果树合成和积累ASA 的研究 | 第18-19页 |
| ·果树合成和积累AsA 的相关研究 | 第18页 |
| ·苹果合成和积累AsA 的相关研究 | 第18-19页 |
| ·果树基因克隆 | 第19页 |
| ·果树目的基因分离与克隆常用方法 | 第19页 |
| ·目前已分离和克隆的AsA 相关酶的基因 | 第19页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-28页 |
| ·试验材料 | 第20-21页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·生化试剂 | 第20页 |
| ·引物 | 第20页 |
| ·仪器 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-28页 |
| ·总RNA 的提取方法 | 第21页 |
| ·总RNA 的检测 | 第21页 |
| ·RT-PCR 体系的建立 | 第21-22页 |
| ·RT 反应 | 第21-22页 |
| ·PCR 扩增 | 第22页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第22-24页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第22-23页 |
| ·回收产物与T 载体的连接 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第23页 |
| ·转化子的检测鉴定 | 第23-24页 |
| 2 2.5 序列测定与分析 | 第24页 |
| ·正义表达载体构建 | 第24-26页 |
| ·构建过程 | 第24-25页 |
| ·植物表达载体的鉴定 | 第25页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·表达载体向农杆菌转化 | 第26页 |
| ·农杆菌Ti 质粒的微量提取 | 第26页 |
| ·含重组质粒农杆菌的鉴定 | 第26页 |
| ·反义表达载体构建 | 第26-28页 |
| ·构建过程 | 第26-27页 |
| ·植物反义表达载体的鉴定 | 第27页 |
| ·表达载体向农杆菌转化 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与分析 | 第28-35页 |
| ·叶片总RNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·CDNA 第一链的合成及PCR 扩增 | 第29页 |
| ·扩增产物的CDNA 克隆 | 第29页 |
| ·序列测定与分析 | 第29-30页 |
| ·正义表达载体构建及转化农杆菌 | 第30-33页 |
| ·反义表达载体构建 | 第33-35页 |
| 第四章 讨论 | 第35-38页 |
| ·ASA 的研究现状及存在问题 | 第35页 |
| ·苹果叶片总RNA 的提取 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第36页 |
| ·基因克隆 | 第36页 |
| ·关于植物正反义表达载体构建及其转化农杆菌 | 第36-38页 |
| 第五章 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-47页 |
| 附录 | 第47-49页 |
| 缩略语表 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
