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一株H5N1亚型猪流感病毒的进化分析及其反向遗传操作系统的建立

第一章 引言第1-17页
   ·流感的发展历史第8页
   ·流感病毒研究进展第8-11页
     ·流感病毒病原结构第8页
     ·流感病毒的分子生物学特性第8-11页
     ·流感病毒的复制第11页
   ·猪流感简介第11-13页
     ·猪流感的历史事件第12页
     ·猪流感的公共卫生意义第12-13页
   ·产生导致人流感大流行病毒株的可能机制第13页
     ·猪作为中间宿主第13页
     ·AIV直接传播给人第13页
   ·A型流感病毒的反向遗传操作系统第13-16页
     ·流感病毒反向遗传技术的发展过程第14-15页
     ·流感病毒反向遗传技术的应用第15-16页
   ·研究目的与意义第16-17页
第二章 猪流感病毒Swine/Fujian/F1/01(H5N1)序列测定及遗传演化分析第17-33页
   ·材料第17页
     ·病毒第17页
     ·SPF鸡胚第17页
     ·主要试剂第17页
     ·引物第17页
   ·方法第17-20页
     ·病毒增殖和血清学鉴定第17页
     ·病毒RNA的提取第17-18页
     ·RT-PCR第18页
     ·PCR产物回收和纯化第18-19页
     ·PCR产物直接测序第19页
     ·病毒核酸序列与氨基酸序列分析第19-20页
   ·结果第20-30页
     ·病毒RNA的RT-PCR产物电泳鉴定结果第20-21页
     ·流感病毒全基因组序列测定结果与各基因的分子遗传衍化分析第21-30页
   ·讨论第30-33页
     ·HA基因第30-31页
     ·NA基因第31页
     ·内部基因第31-33页
第三章 猪流感病毒SWINE/FUJIAN/F1/01(H5N1)对鸡的致病性实验第33-37页
   ·材料第33页
     ·病毒分离株第33页
     ·实验动物第33页
   ·方法第33-34页
     ·病毒的鸡胚半数感染量(EID_(50))的测定第33页
     ·病毒对鸡的静脉接种致病指数(IVPI)的测定第33页
     ·病毒对鸡的鼻腔感染试验及病毒对鸡的组织嗜性试验第33-34页
   ·结果第34-35页
     ·病毒EID_(50)测定结果第34页
     ·病毒静脉接种致病指数(IVPI)的测定第34-35页
     ·病毒对鸡的鼻腔感染试验和对鸡的组织嗜性试验结果第35页
   ·讨论第35-37页
第四章 猪流感病毒Swine/Fujian/F1/01(H5N1)反向遗传操作系统的建立第37-44页
   ·材料第37-38页
     ·病毒第37页
     ·鸡胚第37页
     ·pBD载体第37页
     ·主要试剂第37页
     ·引物第37-38页
   ·方法第38-41页
     ·病毒RNA提取、反转录与PCR第38页
     ·重组pBD质粒的构建第38-40页
     ·病毒的拯救第40-41页
   ·结果第41-43页
     ·病毒RNA的RT–PCR琼脂糖凝胶电泳鉴定结果第41-42页
     ·Klenow大片段酶处理pBD载体DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定结果第42页
     ·粗提pBD克隆质粒PCR鉴定琼脂糖凝胶电泳结果第42页
     ·阳性pBD克隆质粒琼脂糖凝胶电泳鉴定结果第42-43页
     ·阳性pBD克隆质粒序列测定结果第43页
     ·救获病毒鉴定结果第43页
   ·讨论第43-44页
结论第44-45页
参考文献第45-50页
附录第50-55页
致谢第55-56页
作者简介第56页

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