| 一 前言 | 第1-20页 |
| ·卵透明带研究概述 | 第8-11页 |
| ·毕赤酵母表达系统概述 | 第11-14页 |
| ·蛋白质工程与定点诱变技术 | 第14-17页 |
| ·本研究课题的立论依据、目的及意义 | 第17-19页 |
| ·本研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 二 实验材料、试剂和仪器 | 第20-23页 |
| ·主要材料 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21-23页 |
| 三 实验方法 | 第23-39页 |
| ·重组质粒的构建 | 第23-33页 |
| ·通过重叠延伸PCR对hZP3基因进行定点诱变 | 第23-27页 |
| ·表达载体的制备 | 第27-28页 |
| ·外源基因与载体的双酶切 | 第28-29页 |
| ·外源基因与载体的连接 | 第29-30页 |
| ·氯化钙法制备大肠杆菌DH5α和Top10感受态细胞 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌DH5α和Top10的转化 | 第31页 |
| ·转化子的筛选和鉴定 | 第31-33页 |
| ·重组质粒在毕赤酵母中的表达 | 第33-39页 |
| ·酵母细胞的转化 | 第33-35页 |
| ·阳性克隆的筛选与表达蛋白的鉴定 | 第35-39页 |
| 四 实验结果 | 第39-50页 |
| ·重叠延伸PCR介导的hZP3基因的定点诱变 | 第39-41页 |
| ·重组质粒的构建及鉴定结果 | 第41-43页 |
| ·重组质粒的序列测定结果 | 第43页 |
| ·毕赤酵母的转化结果 | 第43-44页 |
| ·阳性克隆的鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·多拷贝转化子的筛选 | 第45页 |
| ·目的蛋白的表达结果 | 第45-50页 |
| 五 讨论与小结 | 第50-56页 |
| ·重叠延伸PCR介导的定点诱变 | 第50-51页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第51-52页 |
| ·hZP3基因在毕赤酵母中的表达及其影响因素 | 第52-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 附录一 各种试剂的配制方法 | 第61-67页 |
| 附录二 全长hZP3 cDNA序列 | 第67-68页 |
| 附录三 重组质粒测序结果 | 第68-79页 |
| 在校期间发表论文情况 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |