| 摘要 | 第1-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-21页 |
| ·昆虫滞育的概念 | 第8页 |
| ·昆虫滞育的分类 | 第8-9页 |
| ·昆虫滞育的环境因子 | 第9-12页 |
| ·光周期 | 第9-11页 |
| ·温度 | 第11页 |
| ·食料 | 第11-12页 |
| ·湿度 | 第12页 |
| ·密度 | 第12页 |
| ·滞育与休眠 | 第12-13页 |
| ·昆虫滞育内分泌学研究 | 第13-14页 |
| ·昆虫滞育相关的代谢机制的研究 | 第14-18页 |
| ·碳水化合物的代谢 | 第14-16页 |
| ·水分代谢 | 第16页 |
| ·脂肪及脂肪酸代谢 | 第16页 |
| ·蛋白质和氨基酸代谢 | 第16-17页 |
| ·蛋白质代谢 | 第16-17页 |
| ·氨基酸代谢 | 第17页 |
| ·核酸代谢 | 第17-18页 |
| ·昆虫滞育的分子生物学研究 | 第18-21页 |
| ·滞育激素的分离和纯化 | 第18页 |
| ·滞育激素的结构和功能 | 第18页 |
| ·滞育激素基因的克隆、结构特征和表达 | 第18-19页 |
| ·滞育激素基因的定位 | 第19页 |
| ·滞育相关酶的研究 | 第19-21页 |
| ·滞育激素调控代谢过程中的关键酶—海藻糖酶的研究 | 第19-20页 |
| ·滞育解除过程中的关键酶—山梨醇脱氢酶的研究 | 第20-21页 |
| 2 引言 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-42页 |
| ·试验材料 | 第22-28页 |
| ·供试昆虫 | 第22页 |
| ·供试菌种及质粒 | 第22页 |
| ·供试酶类、抗体与Marker | 第22页 |
| ·供试试剂盒 | 第22页 |
| ·缓冲溶液 | 第22页 |
| ·转化酵母与表达的试剂 | 第22-25页 |
| ·培养基储存液及培养基 | 第25-26页 |
| ·培养基储存液 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·SDS—PAGE电泳 | 第26-27页 |
| ·SDS—PAGE电泳液的配制 | 第26-27页 |
| ·SDS—PAGE电泳凝胶的灌制 | 第27页 |
| ·Western blotting所用溶液 | 第27-28页 |
| ·其它溶液 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28-42页 |
| ·总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| ·RT-PCR | 第29-30页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| ·PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第30页 |
| ·PCR产物纯化 | 第30页 |
| ·质粒的连接 | 第30-31页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备和质粒的转化 | 第31-33页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第31页 |
| ·重组克隆质粒的转化 | 第31-33页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第33页 |
| ·重组克隆质粒DNA的提取 | 第33页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组克隆质粒双酶切鉴定 | 第33页 |
| ·重组克隆质粒的PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·序列测定 | 第34页 |
| ·生物信息学分析 | 第34页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第34-37页 |
| ·重组克隆质粒与表达质粒的双酶切 | 第34-36页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第36页 |
| ·目的片段和表达载体片段的连接 | 第36页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第36-37页 |
| ·pESP-DH重组质粒的抽提 | 第37页 |
| ·pESP-DH重组质粒的鉴定 | 第37页 |
| ·pESP-DH重组质粒的序列测定 | 第37页 |
| ·重组表达酵母的获得与鉴定 | 第37-39页 |
| ·裂殖酵母感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·pESP-DH重组质粒的转化 | 第38页 |
| ·制备酵母甘油母株 | 第38-39页 |
| ·重组表达酵母PCR鉴定 | 第39页 |
| ·重组表达酵母的小量诱导表达 | 第39-40页 |
| ·酵母细胞培养的准备 | 第39-40页 |
| ·小规模诱导表达GST-DH融合蛋白 | 第40页 |
| ·诱导表达的GST-DH融合蛋白检测与分析 | 第40-42页 |
| ·融合蛋白的预处理 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第40页 |
| ·Western blotting分析 | 第40-42页 |
| 4 结果与分析 | 第42-49页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第42页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·DH基因序列测定 | 第43页 |
| ·DH基因的生物信息学分析 | 第43-46页 |
| ·pESP-DH重组表达质粒的鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组表达质粒的PCR鉴定 | 第47页 |
| ·重组表达质粒双酶切鉴定 | 第47页 |
| ·重组表达酵母PCR鉴定 | 第47页 |
| ·酵母表达产物的SDS-PAG分析 | 第47-48页 |
| ·酵母表达产物的Western blotting分析 | 第48-49页 |
| 5 结论与讨论 | 第49-52页 |
| ·结论 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 英文摘要 | 第57页 |