| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一部分 禽流感病毒H9N2亚型核蛋白(NP)和血凝素(HA)基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第14-78页 |
| 第1章 禽流感文献综述 | 第14-37页 |
| 1．1 禽流感概述 | 第14页 |
| 1．2 禽流感历史及引起的危害 | 第14-20页 |
| 1．2．1 禽流感历史 | 第14-16页 |
| 1．2．2 禽流感最近在世界各地的流行 | 第16-17页 |
| 1．2．3 禽流感在国内的感染情况 | 第17-18页 |
| 1．2．4 禽流感的生态学与公共卫生学意义 | 第18-20页 |
| 1．3 病原学 | 第20-28页 |
| 1．3．1 禽流感病毒形态与大小 | 第20页 |
| 1．3．2 流感病毒化学组成 | 第20-21页 |
| 1．3．3 流感病毒的复制 | 第21-22页 |
| 1．3．4 流感病毒的致病性 | 第22页 |
| 1．3．5 流感病毒的抗原性变异与进化 | 第22-23页 |
| 1．3．6 流感病毒对外界环境的抵抗力 | 第23-24页 |
| 1．3．7 禽流感病毒的基因组结构 | 第24-28页 |
| 1．4 禽流感的流行病学 | 第28-30页 |
| 1．4．1 易感动物 | 第28-29页 |
| 1．4．2 禽流感的传播 | 第29-30页 |
| 1．4．3 潜伏期 | 第30页 |
| 1．4．4 发病率和死亡率 | 第30页 |
| 1．5 禽流感的临床症状 | 第30-31页 |
| 1．6 禽类感染禽流感后的病理变化特点 | 第31-32页 |
| 1．7 禽流感的诊断 | 第32-35页 |
| 1．7．1 病毒的分离鉴定 | 第32-33页 |
| 1．7．2 血清学诊断技术 | 第33-35页 |
| 1．7．3 分子诊断技术 | 第35页 |
| 1．8 禽流感的预防和控制 | 第35-37页 |
| 1．8．1 防止病毒的传入和散播 | 第35-36页 |
| 1．8．2 建立疫情的预警机制 | 第36页 |
| 1．8．3 封锁、隔离和消毒 | 第36页 |
| 1．8．4 疫苗接种和检疫 | 第36-37页 |
| 第2章 禽流感病毒血凝素疫苗研究进展 | 第37-42页 |
| 2．1 亚单位疫苗 | 第37-38页 |
| 2．2 重组疫苗 | 第38页 |
| 2．3 核酸疫苗 | 第38-40页 |
| 2．4 表位疫苗 | 第40-41页 |
| 2．5 转基因植物疫苗 | 第41-42页 |
| 第3章 禽流感病毒核蛋白研究进展 | 第42-47页 |
| 3．1 NP基因的结构 | 第42-43页 |
| 3．2 NP功能研究 | 第43-44页 |
| 3．3 NP在诊断中的应用 | 第44-45页 |
| 3．4 NP免疫学功能及其DNA疫苗研究 | 第45-47页 |
| 第4章 研究目的及意义 | 第47-49页 |
| 第5章 实验材料与方法 | 第49-67页 |
| 5．1 实验材料 | 第49页 |
| 5．1．1 病毒毒株、质粒、细菌及抗体 | 第49页 |
| 5．1．2 工具酶及主要生物学试剂 | 第49页 |
| 5．1．3 主要药品及化学试剂 | 第49页 |
| 5．2 主要试剂及溶液的配置 | 第49-54页 |
| 5．2．1 抗生素类 | 第49-50页 |
| 5．2．2 常用贮存液的配制 | 第50-51页 |
| 5．2．3 培养基 | 第51页 |
| 5．2．4 琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第51页 |
| 5．2．5 α互补检查的试剂 | 第51页 |
| 5．2．6 碱裂解法质粒提取液 | 第51-52页 |
| 5．2．7 SDS—PAGE和Western—blot试剂 | 第52-53页 |
| 5．2．8 包涵体蛋白纯化试剂 | 第53-54页 |
| 5．3 实验方法 | 第54-61页 |
| 5．3．1 引物的设计与合成 | 第54页 |
| 5．3．2 病毒的增殖、收获及纯化 | 第54页 |
| 5．3．3 病毒RNA提取 | 第54-55页 |
| 5．3．4 RT—PCR及DNA片段的电泳检测 | 第55页 |
| 5．3．5 RT—PCR扩增产物回收与纯化 | 第55-56页 |
| 5．3．6 回收的目的DNA片段与克隆载体pMD18—T的连接反应 | 第56页 |
| 5．3．7 大肠杆菌DH5α或BL21 codon Plus感受态细胞的制备 | 第56-57页 |
| 5．3．8 连接产物的转化 | 第57页 |
| 5．3．9 α互补检查方法 | 第57-58页 |
| 5．3．10 重组质粒DNA的提取 | 第58-59页 |
| 5．3．11 重组质粒DNA鉴定 | 第59-61页 |
| 5．4 NP和HA基因的cDNA序列测定与分析 | 第61页 |
| 5．5 表达载体pKG—NP和pKG—HA的构建 | 第61页 |
| 5．6 外源基因的诱导表达与表达产物的初步鉴定 | 第61-63页 |
| 5．7 重组NP蛋白的纯化 | 第63-64页 |
| 5．7．1 重组NP蛋白包涵体的纯化 | 第63-64页 |
| 5．7．2 包涵体的溶解与复性 | 第64页 |
| 5．8 SDS—PAGE和Western—blot | 第64-67页 |
| 5．8．1 SDS—PAGE | 第64-65页 |
| 5．8．2 Western—blot分析 | 第65-67页 |
| 第6章 结果与讨论 | 第67-78页 |
| 6．1 禽流感病毒NP和HA基因的RT- PCR与克隆 | 第67-68页 |
| 6．2 禽流感病毒NP和HA基因DNA序列测定与分析 | 第68-71页 |
| 6．3 禽流感病毒NP和HA基因的表达 | 第71-75页 |
| 6．3．1 表达载体的构建 | 第71-73页 |
| 6．3．2 克隆基因的诱导、表达与检测 | 第73-75页 |
| 6．3．3 免疫学活性检测 | 第75页 |
| 6．4 讨论 | 第75-77页 |
| 6．5 结论 | 第77-78页 |
| 第2部分 鸡毒霉形体pMGA基因在大肠杆菌中的表达研究 | 第78-107页 |
| 第1章 鸡毒霉形体文献综述 | 第78-92页 |
| 1．1 鸡毒霉形体概述 | 第78-79页 |
| 1．2 鸡毒霉形体的致病机理 | 第79-80页 |
| 1．3 鸡毒霉形体结构蛋白研究进展 | 第80-82页 |
| 1．4 鸡毒霉形体病的现代检测技术 | 第82-84页 |
| 1．5 鸡毒霉形体膜蛋白血清学反应特性研究 | 第84-85页 |
| 1．6 鸡毒霉形体粘附因子 | 第85-90页 |
| 1．6．1 鸡毒霉形体粘附素蛋白(pMGA)研究 | 第85-88页 |
| 1．6．2 鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族研究 | 第88页 |
| 1．6．3 pMGA基因的表达调控 | 第88-90页 |
| 1．7 鸡毒霉形体的其他粘附因子 | 第90-92页 |
| 1．7．1 GapA | 第90-91页 |
| 1．7．2 PvPA | 第91-92页 |
| 第2章 研究的目的和意义 | 第92-94页 |
| 第3章 实验材料和方法 | 第94-99页 |
| 3．1 实验材料 | 第94页 |
| 3．2 pMGA基因的克隆及表达策略 | 第94-96页 |
| 3．3 PCR引物设计 | 第96页 |
| 3．4 pMGA基因片段的PCR及克隆 | 第96-97页 |
| 3．5 重组表达质粒的构建与转化 | 第97页 |
| 3．6 外源基因的诱导表达与表达产物的初步鉴定 | 第97页 |
| 3．7 重组蛋白的包涵体的提取 | 第97-98页 |
| 3．7．1 重组蛋白包涵体的提取 | 第97-98页 |
| 3．7．2 包涵体变性、复性和纯化 | 第98页 |
| 3．8 重组蛋白Western—blot分析 | 第98-99页 |
| 第4章 结果与分析 | 第99-107页 |
| 4．1 pMGA基因的部分表达及免疫学活性检测 | 第99-101页 |
| 4．1．1 pMGA基因片段的克隆、重组表达质粒的构建及鉴定 | 第99-100页 |
| 4．1．2 GST—pMGA多肽融合蛋白的表达 | 第100-101页 |
| 4．1．3 Western—blot分析 | 第101页 |
| 4．2 pMGA基因的TGA同义突变及其表达 | 第101-105页 |
| 4．2．1 pMGA基因片段的扩增 | 第101-103页 |
| 4．2．2 含pMGA基因片段表达载体的构建 | 第103页 |
| 4．2．3 GST—pMGA多肽融合蛋白的表达 | 第103-104页 |
| 4．2．4 免疫印迹分析 | 第104-105页 |
| 4．3 讨论 | 第105页 |
| 4．4 结论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
