| 人血清白蛋白基因的克隆及乳腺特异性表达载体的构建(摘要) | 第1-14页 |
| 文献综述 | 第14-40页 |
| 第一章 人血清白蛋白的研究现状 | 第14-22页 |
| ·人血清白蛋白的生物学特性 | 第14-16页 |
| ·分布与含量 | 第14页 |
| ·结构与特性 | 第14-15页 |
| ·生物学功能 | 第15-16页 |
| ·运输功能即载体蛋白 | 第15页 |
| ·维持内环境相对稳定 | 第15页 |
| ·营养供给 | 第15-16页 |
| ·HSA 基因 | 第16页 |
| ·重组HSA 表达系统的研究进展 | 第16-20页 |
| ·原核表达系统 | 第17页 |
| ·酵母表达体系 | 第17-18页 |
| ·植物表达系统 | 第18-19页 |
| ·动物表达系统 | 第19-20页 |
| ·应用与展望 | 第20-22页 |
| 第二章乳腺生物反应器研究进展 | 第22-40页 |
| ·动物乳腺生物反应器的优势 | 第22-23页 |
| ·乳腺生物反应器存在的问题 | 第23页 |
| ·随机整合型乳腺特异表达载体的研究状况 | 第23-32页 |
| ·随机整合载体调控元件的类型 | 第24-27页 |
| ·三种蛋白基因 | 第24-25页 |
| ·调控乳蛋白基因表达的三类重要元件 | 第25-27页 |
| ·所构建的随机整合载体 | 第27-28页 |
| ·目的基因选取 | 第28-29页 |
| ·乳腺表达载体的检验方法 | 第29-32页 |
| ·乳腺细胞表达分析法 | 第29-30页 |
| ·动物乳腺暂态表达法 | 第30-32页 |
| ·转基因小鼠表达法 | 第32页 |
| ·基因打靶载体 | 第32-35页 |
| ·基因打靶的分子基础 | 第33页 |
| ·基因打靶的类型 | 第33-34页 |
| ·基因打靶细胞的选择 | 第34-35页 |
| ·常用的基因转移方式 | 第35-37页 |
| ·磷酸钙沉淀法(Phosphate coprec ipitation) | 第35页 |
| ·显微注射法 | 第35-36页 |
| ·电穿孔法(Electropration) | 第36页 |
| ·脂质体(Liposomes)转化法 | 第36页 |
| ·胚胎干细胞(Totipotent stem cells)介导的基因转移 | 第36页 |
| ·精子介导的基因转移技术 | 第36页 |
| ·核移植(克隆)法介导的基因转移 | 第36-37页 |
| ·国内外乳腺生物反应器的研究状况 | 第37-40页 |
| 试验部分 | 第40-68页 |
| 第三章 人血清白蛋白基因的克隆及序列分析 | 第40-52页 |
| ·材料与方法 | 第40-46页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·试剂和仪器 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-46页 |
| ·引物设计 | 第41页 |
| ·总RNA 的提取 | 第41-42页 |
| ·RNA 的甲醛变性电泳 | 第42页 |
| ·RT-PCR | 第42-43页 |
| ·PCR 产物的纯化、克隆及鉴定 | 第43页 |
| ·cDNA 的序列测定 | 第43页 |
| ·序列同源性分析 | 第43页 |
| ·溶液配制 | 第43-44页 |
| ·胶回收常规操作 | 第44-45页 |
| ·感受态大肠杆菌的制备和转化 | 第45-46页 |
| ·质粒的提取方法 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-49页 |
| ·人肝脏组织总RNA 完整性和HSA基因cDNA 的RT-PCR | 第46-47页 |
| ·重组质粒XbaⅠ酶切鉴定结果 | 第47页 |
| ·核苷酸序列测定 | 第47-48页 |
| ·蛋白质序列分析 | 第48页 |
| ·序列同源性分析结果 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-52页 |
| 第四章 人血清白蛋白基因真核表达载体的构建 | 第52-62页 |
| ·材料和方法 | 第52-58页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·质粒和菌种 | 第52-53页 |
| ·试剂和仪器 | 第53页 |
| ·试验方法 | 第53-58页 |
| ·HSA cDNA的改造 | 第53-54页 |
| ·引物设计合成 | 第53页 |
| ·HESA cDNA基因的PCR 扩增 | 第53页 |
| ·基因的亚克隆、酶切鉴定 | 第53-54页 |
| ·HSA 初级表达载体pBH 的构建 | 第54-55页 |
| ·NheⅠ/BamHⅠ双酶切质粒pBL 和pHESA | 第54页 |
| ·T4 连接酶定向连接成为重组质粒pBH | 第54-55页 |
| ·重组质粒pBH 的克隆及双酶切鉴定和部分序列测定 | 第55页 |
| ·人血清白蛋白乳腺最终表达载体pEGFP-BH 的构建 | 第55-56页 |
| ·pBH、质粒载体pEGFP-C1 的XhoI、MluI 双酶切 | 第55页 |
| ·定向连接成为pEGFP-BH | 第55-56页 |
| ·真核表达载体pEGFP-BH 转化和鉴定 | 第56页 |
| ·人血清白蛋白乳腺特异性表达载体的构建的示意图 | 第56-58页 |
| ·结果 | 第58-59页 |
| ·人血清白蛋白cDNA 的改造结果 | 第58页 |
| ·HSA 初级表达载体pBH 的构建结果 | 第58页 |
| ·人血清白蛋白乳腺最终表达载体pEGFP-BH 构建的结果 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| 第五章 山羊乳腺上皮细胞表达人血清白蛋白基因初步研究 | 第62-68页 |
| ·材料和方法 | 第62-64页 |
| ·材料 | 第62页 |
| ·细胞和质粒 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-64页 |
| ·质粒pEGFP-BH 的纯化 | 第62-63页 |
| ·转染细胞的准备 | 第63页 |
| ·解冻细胞、培养和传代 | 第63页 |
| ·G418 对山羊乳腺上皮细胞的最小致死量测定 | 第63页 |
| ·转染前细胞的处理 | 第63页 |
| ·乳腺上皮细胞的转染 | 第63-64页 |
| ·脂质体-DNA 的准备 | 第63页 |
| ·共转染 | 第63-64页 |
| ·转化的细胞荧光显微镜观察 | 第64页 |
| ·转染细胞外源基因表达的初步检测 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-65页 |
| ·解冻后培养的细胞 | 第64页 |
| ·G418 对山羊乳腺上皮细胞最小致死量的测定结果 | 第64页 |
| ·绿色荧光蛋白的表达 | 第64-65页 |
| ·转染细胞PCR 检测结果 | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 附录 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 作者简介 | 第88页 |
