| 前言 | 第1-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-20页 |
| 1．1 微生物木糖利用的研究 | 第9-10页 |
| 1．2 大肠杆菌D-木糖操纵子的研究 | 第10-12页 |
| 1．3 木糖利用基因工程菌的研究 | 第12-18页 |
| 1．3．1 Zymomonas mobilis | 第13-16页 |
| 1．3．2 Escherichia coli | 第16-17页 |
| 1．3．3 其它 | 第17-18页 |
| 1．4 本课题的研究目的、研究内容 | 第18-19页 |
| 1．4．1 研究目的 | 第18页 |
| 1．4．2 研究内容 | 第18-19页 |
| 1．5 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-40页 |
| 2．1 实验材料 | 第20-27页 |
| 2．1．1 菌株与质粒 | 第20-21页 |
| 2．1．2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2．1．3 蛋白质测定用试剂 | 第22页 |
| 2．1．4 木糖异构酶酶活测定用试剂 | 第22页 |
| 2．1．5 木酮糖激酶酶活测定用试剂 | 第22-23页 |
| 2．1．6 培养基和补充添加物 | 第23-24页 |
| 2．1．7 PCR 反应用引物 | 第24-25页 |
| 2．1．8 分子生物学操作常用溶液配制 | 第25-26页 |
| 2．1．9 主要设备及仪器 | 第26-27页 |
| 2．2 实验方法 | 第27-40页 |
| 2．2．1 菌体培养 | 第27-28页 |
| 2．2．2 大肠杆菌生长曲线测定 | 第28-29页 |
| 2．2．3 氨苄青霉素(Ap)富集和X-EMB平板筛选木糖营养缺陷型突变株 | 第29-31页 |
| 2．2．4 考马斯亮蓝G-250 染色的方法测定蛋白质浓度 | 第31-32页 |
| 2．2．5 木糖异构酶酶活测定 | 第32-33页 |
| 2．2．6 木酮糖激酶酶活测定 | 第33-34页 |
| 2．2．7 PCR 反应 | 第34-35页 |
| 2．2．8 酶切反应 | 第35页 |
| 2．2．9 电泳分析 | 第35-36页 |
| 2．2．10 核酸的乙醇沉淀纯化、回收 | 第36页 |
| 2．2．11 脱磷反应 | 第36页 |
| 2．2．12 连接反应 | 第36页 |
| 2．2．13 感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 2．2．14 重组质粒大肠杆菌感受态细胞转化与转化子的筛选 | 第37页 |
| 2．2．15 重组质粒电穿孔转化Z．mobilis CP4 和转化子的筛选 | 第37页 |
| 2．2．16 质粒的提取 | 第37-39页 |
| 2．2．17 目的条带的回收 | 第39-40页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第40-57页 |
| 3．1 木糖营养缺陷型菌株的构建 | 第40-43页 |
| 3．1．1 E．coli CSH25-1 菌株生长曲线测定 | 第40-41页 |
| 3．1．2 紫外诱变和Ap 富集 | 第41-42页 |
| 3．1．3 木糖营养缺陷型菌株的筛选 | 第42页 |
| 3．1．4 木糖营养缺陷型菌株的酶活测定 | 第42-43页 |
| 3．2 E．coli K12 xylAB 基因的克隆 | 第43-47页 |
| 3．2．1 模板的制备 | 第43-44页 |
| 3．2．2 PCR 反应克隆xylAB | 第44-45页 |
| 3．2．3 连接、转化、筛选与鉴定 | 第45-46页 |
| 3．2．4 重组质粒pBSKS(+)-xylAB 转化DH5a 及克隆片段测序 | 第46-47页 |
| 3．3 E．coli K12 xylAB 在CP4 中的表达 | 第47-57页 |
| 3．3．1 pZB1-xylAB 质粒的构建 | 第47-48页 |
| 3．3．2 pZB1-Pgap-xylAB 质粒的构建 | 第48-54页 |
| 3．3．3 xylAB 和Pgap-xylAB 在CP4 中的表达 | 第54-57页 |
| 第四章 结论 | 第57-58页 |
| 4．1 结论 | 第57页 |
| 4．2 建议 | 第57-58页 |
| 符号表 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录一 E．coli CSH25-1 菌株生长曲线测定的原始实验记录 | 第65-68页 |
| 附录二 Ap 处理及筛选木糖营养缺陷型突变株的原始实验记录 | 第68-70页 |
| 附录三 文中涉及到的质粒及有关基因物理图谱 | 第70-74页 |
| 附录四 xylAB 测序结果 | 第74-79页 |
| 附录五 gap-ATG-xx/SalⅠ测序结果 | 第79-81页 |
| 发表论文情况 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
