| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-24页 |
| 一、IgA生物学 | 第10-14页 |
| 1、IgA的生物合成与代谢 | 第10-11页 |
| 2、IgA的结构 | 第11-12页 |
| 3、IgA的生物学功能 | 第12-14页 |
| 二、IgA的Fc受体FcαRI | 第14-22页 |
| 1、FcαRI/CD89的细胞分布和表达调控 | 第14-15页 |
| 2、FcαRI/CD89的基因结构 | 第15-17页 |
| 3、FcαRI/CD89的蛋白质结构 | 第17-18页 |
| 4、FcαRI/CD89与IgA的结合 | 第18-19页 |
| 5、FcαRI/CD89的信号转导 | 第19-21页 |
| 6、FcαRI/CD89介导的生理功能 | 第21-22页 |
| 三、本论文的研究目标 | 第22-24页 |
| 第二章 材料和方法 | 第24-52页 |
| 一、主要化学试剂及实验材料 | 第24-29页 |
| 1、主要化学试剂 | 第24-25页 |
| 2、工具酶、分子量标准及试剂盒 | 第25页 |
| 3、抗体 | 第25页 |
| 4、cDNA克隆和质粒载体 | 第25页 |
| 5、细胞株 | 第25-26页 |
| 6、引物 | 第26页 |
| 7、主要仪器和设备 | 第26-27页 |
| 8、软件 | 第27页 |
| 9、常用试剂和培养基 | 第27-29页 |
| 二、实验方法 | 第29-52页 |
| 1、分子生物学常规实验操作 | 第29-42页 |
| ·菌种的保藏 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| ·质粒的提取和纯化 | 第30-32页 |
| ·质粒的小量提取 | 第30-31页 |
| ·质粒的大量提取和纯化 | 第31-32页 |
| ·E. coli感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·DNA转化感受态细胞 | 第32页 |
| ·琼脂糖凝胶分离DNA片段的回收 | 第32-33页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺蛋白凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第33-34页 |
| ·Native PAGE | 第34页 |
| ·小分子量蛋白(多肽)电泳 | 第34页 |
| ·DNA分子的酶切与连接 | 第34-35页 |
| ·PCR产物克隆 | 第35页 |
| ·PCR鉴定重组菌落——菌落PCR(Colony PCR) | 第35-36页 |
| ·PCR引物诱变(Site-specific Mutagenesis by Overlap Extension) | 第36页 |
| ·重组克隆的诱导表达——小量分析 | 第36-38页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第38页 |
| ·Semi-dry Western-Blot(蛋白印迹) | 第38-39页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第39-40页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第40-41页 |
| ·280nm(A_(280))光吸收法 | 第40-41页 |
| ·Bradford法 | 第41页 |
| ·Ellman法测定游离巯基浓度 | 第41-42页 |
| 2、CD89受体胞外区在原核表达载体中的表达 | 第42-44页 |
| 3、重原子衍射用硒标sCD89重组蛋白(Se-sCD89)的表达 | 第44页 |
| 4、sCD89的昆虫细胞表达 | 第44页 |
| 5、单克隆抗体的纯化 | 第44-45页 |
| 6、单克隆抗体与层析介质的交连和使用 | 第45-46页 |
| 7、GST亲和层析 | 第46页 |
| 8、含有His_6·Tag融合蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 9、sCD89包涵体蛋白的重折叠 | 第47页 |
| 10、悬滴法生长晶体的一般方法 | 第47-49页 |
| ·晶体生长蛋白样品的准备 | 第47-48页 |
| ·晶体生长环境的准备 | 第48页 |
| ·悬滴法生长晶体 | 第48-49页 |
| 11、重折叠sCD89蛋白的结晶 | 第49页 |
| 12、奈瑟氏淋球菌的培养和IgA1蛋白酶的提取 | 第49-50页 |
| 13、人IgA1的分离和纯化 | 第50页 |
| 14、IgA Fe(Feα)CH2CH3的克隆和表达 | 第50-51页 |
| 15、IgA Fe(Fcα)CH2CH3包涵体的重折叠 | 第51-52页 |
| 第三章 结果 | 第52-90页 |
| 一、CD89受体胞外区的表达 | 第52-56页 |
| 1、sCD89的非融合表达(天然蛋白) | 第52-53页 |
| 2、sCD89的GST融合表达 | 第53-54页 |
| 3、sCD89his融合蛋白 | 第54页 |
| 4、pelB引导的周质分泌 | 第54-55页 |
| 5、昆虫细胞表达 | 第55-56页 |
| 二、抗体对CD89结合区域的定位 | 第56-61页 |
| 三、RR同义突变提高sCD89在E.coli中的表达量 | 第61-63页 |
| 四、从包涵体中复性和纯化重组蛋白 | 第63-76页 |
| 1、包涵体蛋白的纯化 | 第63页 |
| 2、sCD89包涵体蛋白的重折叠 | 第63-76页 |
| ·、sCD89包涵体蛋白在精氨酸盐复性液中的重折叠 | 第63-64页 |
| ·、sCD89包涵体蛋白在尿素复性液中的重折叠 | 第64-68页 |
| ·、sCD89包涵体蛋白在盐酸胍复性液中的重折叠 | 第68-71页 |
| ·、sCD89his包涵体蛋白在盐酸胍复性液中的重折叠 | 第71-73页 |
| ·、sCD89his包涵体蛋白的柱上重折叠 | 第73-74页 |
| ·、自装Ni-NTA层析柱上的重折叠 | 第73-74页 |
| ·、预装Ni-NTA层析柱上的重折叠(A|¨KTAprime) | 第74页 |
| ·、硒代sCD89his包涵体蛋白的重折叠 | 第74-76页 |
| 五、sCD89的结晶和晶体结构 | 第76-85页 |
| 1、结晶前的蛋白质溶液 | 第76页 |
| 2、结晶条件 | 第76页 |
| 3、硒代衍生物的结晶 | 第76-77页 |
| 4、晶体的衍射和结构解析 | 第77-82页 |
| 5、sCD89的晶体结构 | 第82-85页 |
| 六、IgA Fc的制备 | 第85-87页 |
| 1、IgA1的分离纯化 | 第85页 |
| 2、IgA1的酶切 | 第85-87页 |
| 七、Fcα的克隆和表达 | 第87-90页 |
| 1、Fcα的克隆和表达 | 第87页 |
| 2、IgA Fc(Feα)CH2CH3包涵体的重折叠 | 第87-90页 |
| 第四章 讨论 | 第90-106页 |
| 一、功能CD89的制备和纯化 | 第90-96页 |
| 二、IgA配体片段的制备 | 第96-97页 |
| 三、sCD89的晶体结构及其配体结合特征 | 第97-101页 |
| 四、CD89与同源分子的比较 | 第101-106页 |
| 综述 古老的家族，现实的故事——LILR白细胞免疫球蛋白样受体家族 | 第106-115页 |
| 摘要 | 第106-107页 |
| 一、LILR受体的细胞分布 | 第107-108页 |
| 二、LILR的基因结构 | 第108-110页 |
| 三、LILR受体的蛋白质结构 | 第110-112页 |
| 四、LILR受体的生物学功能 | 第112-115页 |
| 参考文献 | 第115-129页 |
| 附录1 攻读博士学位期间发表的文章情况 | 第129-130页 |
| 附录2 质粒载体图谱和多克隆位点 | 第130-138页 |
| 致谢 | 第138页 |
