| 中文摘要 | 第1-7页 |
| SUMMARY | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-12页 |
| 材料与方法 | 第12-46页 |
| 1．实验材料 | 第12-20页 |
| 2．实验方法 | 第20-46页 |
| 2．1 RT-PCR方法克隆特异的cDNA片段 | 第20-22页 |
| 2．2 质粒载体的构建 | 第22-25页 |
| 2．3 重组蛋白的表达与纯化 | 第25-28页 |
| 2．4 多克隆抗体的制备 | 第28-30页 |
| 2．5 睾丸抽提液的制备 | 第30-31页 |
| 2．6 Western blot分析 | 第31-32页 |
| 2．7 Northern杂交 | 第32-33页 |
| 2．8 免疫组织化学方法 | 第33页 |
| 2．9 酵母双杂交cDNA文库滴度的测定与扩增 | 第33-34页 |
| 2．10 酵母转化 | 第34-37页 |
| 2．11 β半乳糖苷酶活性的分析与检测 | 第37-38页 |
| 2．12 酵母质粒的提取与电化 | 第38-40页 |
| 2．13 阳性克隆插入片段的PCR扩增及鉴 | 第40页 |
| 2．14 细胞的复苏、传代、冻存 | 第40页 |
| 2．15 真核细胞的转染 | 第40-41页 |
| 2．16 荧光蛋白与细胞荧光的共定位 | 第41-42页 |
| 2．17 RSA14-44和PSMB5稳定细胞株的筛选 | 第42-43页 |
| 2．18 RSA14-44和PSMB5的体外结合实验 | 第43-44页 |
| 2．19 RSA14-44和PSMB5的体内结合实验 | 第44页 |
| 2．20 20S及26S蛋白酶体的活性检测 | 第44-45页 |
| ·数据统计 | 第45-46页 |
| 实验结果 | 第46-84页 |
| 第一部分：基因序列和蛋白功能的分析 | 第46-52页 |
| 1．RSA14-44的基因序列及读码框 | 第46-47页 |
| 2．RSA14-44基因序列BLAST结果 | 第47-48页 |
| 3．RSA14-44蛋白序列BLAST结果 | 第48页 |
| 4．RSA14-44基因编码蛋白的结构分析 | 第48-51页 |
| 5 大鼠多组织RSA14-44基因表达分析 | 第51-52页 |
| 第二部分：RSA14-44蛋白功能的研究 | 第52-84页 |
| 1．RSA14-44蛋白的表达与纯化 | 第52-55页 |
| 2．酵母双杂交筛选与RSA14-44相互作用的蛋白质分子 | 第55-65页 |
| 3．人20S蛋白酶体β亚单位编码区全长的克隆 | 第65-67页 |
| 4．PSMB5蛋白在原核细胞表达及纯化 | 第67-70页 |
| 5．PSMB5和RSA14-44蛋白的体外结合验证 | 第70-72页 |
| 6．PSMB5和RSA14-44蛋白的体内结合验证 | 第72-74页 |
| 7．RSA14-44和PSMB5在真核细胞中的表达定位 | 第74-78页 |
| 8．RSA14-44对泛素水解酶-26S及20S蛋白酶体活性的影响 | 第78-79页 |
| 9．RSA14-44稳定克隆的检测 | 第79-80页 |
| 10．RSA14-44及PSMB5蛋白在大鼠睾丸组织中的定位 | 第80-84页 |
| 讨论 | 第84-93页 |
| 1．利用生物信息学预测RSA14-44的生物学功能 | 第84-87页 |
| 2．酵母双杂交筛选与RSA14-44相互作用的蛋白 | 第87-88页 |
| 3．RSA14-44与PSMB5相互作用的证实 | 第88页 |
| 4．RSA14-44与PSMB5相互作用对蛋白酶体活性的影响 | 第88-91页 |
| 5．RSA14-44在精子发生中的功能地位 | 第91-93页 |
| 总结 | 第93-95页 |
| 附录 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-102页 |
| 文献综述 | 第102-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
