| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 1 前言 | 第16-33页 |
| ·花生转基因研究的意义 | 第16-17页 |
| ·花生转基因技术体系 | 第17-26页 |
| ·植物基因转化受体系统 | 第17-18页 |
| ·花生的组织培养与植株再生 | 第18-21页 |
| ·以花生叶片为外植体的植株再生 | 第18-19页 |
| ·以花生未成熟胚为外植体的植株再生 | 第19-20页 |
| ·成熟种子来源外植体的植株再生 | 第20-21页 |
| ·花生原生质体培养 | 第21页 |
| ·花生基因转化方法的研究 | 第21-26页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化法 | 第21-23页 |
| ·基因枪介导法 | 第23-25页 |
| ·聚乙二醇介导的基因转化法 | 第25页 |
| ·电激法基因转化 | 第25页 |
| ·花粉管通道法的基因转化 | 第25-26页 |
| ·成功转化花生的外源基因 | 第26-29页 |
| ·抗虫基因 | 第26-27页 |
| ·抗病毒基因 | 第27页 |
| ·抗真菌病基因 | 第27-28页 |
| ·选择标记基因 | 第28页 |
| ·报告基因 | 第28-29页 |
| ·花生组织培养与转基因研究存在的主要问题 | 第29-30页 |
| ·本试验选用的目的基因 | 第30-32页 |
| ·抗真菌γ-硫茧蛋白Rs-afp1基因的抗病机理及转化研究 | 第30-31页 |
| ·γ-维生素E甲基转移酶基因的作用及转化研究 | 第31-32页 |
| ·本研究的主要内容和目标 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-44页 |
| ·试验材料 | 第33-35页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33-34页 |
| ·菌株与质粒 | 第34-35页 |
| ·试验方法 | 第35-44页 |
| ·外植体的准备 | 第35页 |
| ·花生叶片培养的植株再生 | 第35-36页 |
| ·器官发生途径的植株再生 | 第35-36页 |
| ·胚胎发生途径的植株再生 | 第36页 |
| ·花生基因转化体系的建立 | 第36-38页 |
| ·脱菌抗生素浓度的筛选 | 第36-37页 |
| ·花生转化 nptⅡ基因筛选抗生素及适宜浓度试验 | 第37页 |
| ·农杆菌的活化与外植体的侵染 | 第37页 |
| ·菌液浓度对转化率的影响试验 | 第37页 |
| ·共培养时间对转化率的影响试验 | 第37-38页 |
| ·不同苗龄对转化率的影响试验 | 第38页 |
| ·培养基及预培养时间对转化率的影响试验 | 第38页 |
| ·转基因植株的 Gus 基因检测(组织化学染色法) | 第38页 |
| ·转基因花生的分子生物学鉴定 | 第38-44页 |
| ·含目的基因质粒 DNA 的制备 | 第38-39页 |
| ·花生基因组 DNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第40-41页 |
| ·花生基因组DNA的酶切 | 第41页 |
| ·电泳及转膜 | 第41-42页 |
| ·探针标记 | 第42-43页 |
| ·Southem blotting | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-72页 |
| ·花生叶片培养的植株再生 | 第44-53页 |
| ·花生叶片培养不定芽诱导体系的建立 | 第44-49页 |
| ·叶片外植体的选择 | 第44页 |
| ·基因型及培养基的选择 | 第44-48页 |
| ·花生叶片愈伤组织再生花器官的研究 | 第48-49页 |
| ·花生叶片培养体细胞胚诱导体系的建立 | 第49-53页 |
| ·2,4-D 浓度对花生胚小叶产生愈伤质量的影响 | 第49-50页 |
| ·花生胚小叶在不同 2,4-D 浓度培养基中的褐化率 | 第50页 |
| ·2,4-D 浓度对花生胚小叶出愈率的影响 | 第50-51页 |
| ·2,4-D 浓度对胚性愈伤成胚数的影响 | 第51-52页 |
| ·2,4-D 浓度对胚性愈伤成苗率的影响 | 第52-53页 |
| ·优化的花生胚小叶再生体系 | 第53页 |
| ·花生基因转化的影响因素分析 | 第53-61页 |
| ·头孢霉素敏感性试验 | 第53-54页 |
| ·花生转化 nptⅡ基因筛选抗生素及适宜浓度的确立 | 第54-58页 |
| ·Kan 对花生叶片组织培养的影响 | 第55页 |
| ·新霉素对花生叶片组织培养的影响 | 第55-56页 |
| ·G418 对花生叶片组织培养的影响 | 第56页 |
| ·苗期花生未展开叶对 Kan 涂抹的反应 | 第56-58页 |
| ·菌液浓度对转化率的影响 | 第58页 |
| ·共培养时间对转化率的影响 | 第58-59页 |
| ·不同种子萌发天数的幼叶对农杆菌转化率的影响 | 第59-60页 |
| ·培养基及预培养时间对花生胚小叶转化率的影响 | 第60-61页 |
| ·农杆菌侵染花生外植体进行基因转化的适宜条件 | 第61页 |
| ·转 Rs-afp1 基因花生植株的获得 | 第61-69页 |
| ·Rs-afp1 基因的花生转化及卡那霉素抗性植株的获得 | 第61-65页 |
| ·侵染受体类型对 Rs-afp1 基因转化率的影响 | 第61-62页 |
| ·基因型对 Rs-afp1 基因转化率的影响 | 第62-64页 |
| ·转基因再生芽的培养时间对不定根诱导率的影响 | 第64页 |
| ·转基因植株的移栽成活率分析 | 第64-65页 |
| ·转基因植株报告基因的检测 | 第65页 |
| ·转基因植株的抗病性表现 | 第65页 |
| ·转 Rs-afp1 基因花生植株的分子检测 | 第65-69页 |
| ·转 Rs-afp1 基因花生植株的 PCR 分析 | 第65-67页 |
| ·转 Rs-afp1 基因花生植株的 PCR-Southern-blotting 分析 | 第67页 |
| ·转 Rs-afp1 基因花生植株的 Southern-blotting 分析 | 第67-69页 |
| ·转γ-tmt 基因花生植株的获得 | 第69-72页 |
| ·γ-tmt 基因的花生转化及 PPT 抗性植株的获得 | 第69页 |
| ·花生基因型和外植体对γ-tmt 基因转化效率的影响 | 第69页 |
| ·转γ-tmt 基因花生植株的分子检测 | 第69-72页 |
| ·转γ-tmt 基因花生植株的 PCR 分析 | 第69-71页 |
| ·转γ-tmt 基因花生植株的 PCR-Southern-blotting | 第71页 |
| ·转γ-tmt 基因花生植株的 Southern-blotting 分析 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-77页 |
| ·影响花生转化效率的主要因素分析 | 第72-74页 |
| ·筛选标记基因(npt Ⅱ和 bar)及报告基因(gusA)的应用效果分析 | 第74-75页 |
| ·转基因花生的安全性和应用前景 | 第75-76页 |
| ·本研究的创新点 | 第76-77页 |
| 5 结论 | 第77-80页 |
| ·花生胚小叶再生体系优化 | 第77页 |
| ·农杆菌侵染花生外植体进行基因转化的适宜条件 | 第77-78页 |
| ·基因型与侵染受体类型对转化率的影响 | 第78页 |
| ·Rs-afp1 基因转入花生栽培品种 | 第78页 |
| ·γ-tmt 基因转入花生栽培品种 | 第78页 |
| ·农杆菌介导途径进行花生遗传转化的技术规程 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-91页 |
| 附录 | 第91-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第97-98页 |
| 图版 | 第98-102页 |
