| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 前言 | 第8-17页 |
| 1 遗传转化研究进展 | 第8-12页 |
| ·植物遗传转化研究概况 | 第8页 |
| ·植物转基因技术的发展与现状 | 第8-9页 |
| ·植物转基因方法 | 第9-12页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第9-10页 |
| ·外源基因直接导入法 | 第10-11页 |
| ·种质系统的遗传转化 | 第11-12页 |
| 2 遗传转化在油菜上的应用 | 第12-14页 |
| ·转基因与油菜抗性 | 第12-13页 |
| ·抗真菌病和抗病毒病 | 第12-13页 |
| ·抗虫 | 第13页 |
| ·抗除草剂 | 第13页 |
| ·通过转基因改善油菜品质 | 第13-14页 |
| 3 本课题提出的目的和意义 | 第14-17页 |
| ·几丁质酶 | 第14-15页 |
| ·草酸氧化酶 | 第15页 |
| ·油菜菌核病 | 第15-16页 |
| ·抗衰老启动子 | 第16页 |
| ·本课题的研究内容 | 第16-17页 |
| 材料与方法 | 第17-26页 |
| 1 实验材料 | 第17-18页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·根癌农杆菌菌株及相关质粒 | 第17页 |
| ·病原菌 | 第17-18页 |
| ·试剂及仪器 | 第18页 |
| 2 实验方法 | 第18-26页 |
| ·组织发育特异性表达抗病双基因载体的构建 | 第18页 |
| ·培养基和培养条件 | 第18页 |
| ·质粒DNA的分离与操作 | 第18页 |
| ·转基因方法 | 第18-19页 |
| ·根癌农杆菌的培养 | 第18页 |
| ·根癌农杆菌浸染油菜花序 | 第18-19页 |
| ·种子的收获 | 第19页 |
| ·转基因后代的鉴定 | 第19-25页 |
| ·转基因植株的卡那霉素抗性筛选 | 第19页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第19-20页 |
| ·Southern blot分析 | 第20-22页 |
| ·反转录PCR(RT-PCR) | 第22-24页 |
| ·转基因植株的抗性鉴定 | 第24-25页 |
| ·核盘菌的培养 | 第24页 |
| ·离体叶片接种鉴定 | 第24页 |
| ·离体花瓣接种鉴定 | 第24-25页 |
| ·离体叶片草酸抗性鉴定 | 第25页 |
| ·转基因植株的命名 | 第25-26页 |
| 结果与分析 | 第26-40页 |
| 1 组织发育特异性表达双基因载体ApSCO的获得 | 第26-27页 |
| ·含SAG12启动子、几丁质酶和细胞膜引导肽的中间载体的构建 | 第26页 |
| ·含草酸氧化酶的中间载体的构建 | 第26页 |
| ·组织和发育特异性表达双基因载体的构建 | 第26-27页 |
| 2 以in planta方法转化甘蓝型油菜 | 第27页 |
| 3 卡那霉素筛选in planta种子 | 第27-29页 |
| 4 转基因植株的PCR检测分析 | 第29-30页 |
| 5 in planta方法的转化效率 | 第30页 |
| 6 离体叶片接种及鉴定结果 | 第30-32页 |
| 7 离体叶片草酸抗性检测及分析 | 第32-34页 |
| 8 转基因植株离体叶片接种与草酸抗性分析得出的两种病情指数比较 | 第34-35页 |
| 9 转基因植株离体衰老叶片与幼嫩叶片接种比较 | 第35-36页 |
| 10 离体花瓣接种鉴定及结果 | 第36-37页 |
| 11 Southern检测结果 | 第37-38页 |
| 12 RT-PCR检测结果 | 第38-40页 |
| 讨论 | 第40-45页 |
| 1 抗衰老启动子pSAG12在油菜抗病中的应用 | 第40-41页 |
| 2 SAG12的表达模式与抗病的关系 | 第41页 |
| 3 花瓣的衰老与油菜抗病的关系 | 第41页 |
| 4 In planta转化方法在甘蓝型油菜中的应用 | 第41-43页 |
| ·In planta转化中转化子的筛选体系 | 第41-42页 |
| ·影响幼苗萌发的条件 | 第42页 |
| ·In planta转化方法的应用前景 | 第42-43页 |
| 5 双基因共转化可进一步提高转基因油菜对菌核病的抗性 | 第43-44页 |
| 6 转基因植物中卡那霉素(Kan~r)标记基因的生物安全性 | 第44-45页 |
| 附录 | 第45-48页 |
| 附录1 MS培养基成分 | 第45页 |
| 附录2 LB液体培养基 | 第45页 |
| 附录3 PDA土豆培养基 | 第45页 |
| 附录4 DNA微量提取程序 | 第45-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
