大豆PEP羧化酶反义基因的克隆和载体构建
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-22页 |
| 1 我国大豆生产的现状与展望 | 第12-13页 |
| 2 反义技术的机理和应用 | 第13-17页 |
| ·反义技术及其作用机制 | 第13-15页 |
| ·反义技术在作物改良上的应用 | 第15-17页 |
| 3 本研究的特点和意义 | 第17-22页 |
| ·利用PEP羧化酶在植物生理代谢中的地位 | 第17-19页 |
| ·农杆菌介导基因转化 | 第19-20页 |
| ·研究意义和创新 | 第20-22页 |
| 材料和方法 | 第22-39页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| ·试材 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·菌株和质粒 | 第22-23页 |
| ·PCR引物 | 第23页 |
| ·所用培养基 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-39页 |
| ·核酸的提取 | 第24-27页 |
| ·总RNA的提取和纯化 | 第24-25页 |
| ·植物DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·PCR技术 | 第27-30页 |
| ·RT-PCR | 第27-29页 |
| ·普通PCR | 第29-30页 |
| ·酶切和连接 | 第30-32页 |
| ·不对称相容末端的酶切和连接 | 第30-31页 |
| ·不相容粘性末端的酶切和连接 | 第31-32页 |
| ·T载体的连接 | 第32页 |
| ·感受态的制备和宿主菌的转化 | 第32-34页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第32-33页 |
| ·农杆菌感受态的制备和转化 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的细菌菌落鉴定 | 第34-35页 |
| ·α互补现象的检测 | 第34页 |
| ·质粒限制酶切鉴定和PCR检测 | 第34-35页 |
| ·电泳回收 | 第35-36页 |
| ·百脉根基因转化和鉴定 | 第36-37页 |
| ·无菌系的获得 | 第36页 |
| ·工程菌液的制备 | 第36页 |
| ·农杆菌浸染和共培养 | 第36-37页 |
| ·分化选择培养 | 第37页 |
| ·再生植株的检测 | 第37-39页 |
| ·GUS组织化学分析 | 第37-38页 |
| ·抗性检测和PCR检测 | 第38-39页 |
| 结果和讨论 | 第39-58页 |
| 1 克隆PEP基因 | 第39-44页 |
| ·大豆总RNA提取和纯化 | 第39-40页 |
| ·引物设计和反转录PCR | 第40-41页 |
| ·连入T载体 | 第41页 |
| ·测序分析 | 第41-43页 |
| ·亚克隆 | 第43-44页 |
| 2 构建反义PEP基因表达载体Dantip | 第44-45页 |
| 3 克隆内含子 | 第45-48页 |
| ·大豆DNA的提取 | 第45页 |
| ·设计内含子PCR引物、扩增内含子 | 第45-46页 |
| ·连入T载体 | 第46-47页 |
| ·测序分析 | 第47-48页 |
| 4 构建发夹式反义PEP基因表达载体Dpip | 第48-51页 |
| 5 农杆菌介导百脉根的转化 | 第51-58页 |
| ·确定外植体抗性筛选浓度 | 第51-52页 |
| ·百脉根遗传转化体系的验证与优化 | 第52-53页 |
| ·农杆菌介导反义PEP基因转化百脉根 | 第53-55页 |
| ·再生植株的鉴定 | 第55-58页 |
| ·抗性培养鉴定 | 第55-56页 |
| ·PCR鉴定转化植株 | 第56-58页 |
| 小结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
