| 摘要 | 第1-7页 |
| 1 引言 | 第7-13页 |
| ·细胞培养和细胞系选育的意义 | 第7-8页 |
| ·细胞培养和细胞系选育在濒危动物遗传资源保存上的应用 | 第8-9页 |
| ·大熊猫的生存危机和珍贵的遗传价值 | 第9-10页 |
| ·细胞系建立的过程 | 第10-13页 |
| ·细胞的分离和纯化 | 第10页 |
| ·细胞培养 | 第10-12页 |
| ·细胞培养的环境 | 第12-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-19页 |
| ·试验材料 | 第13-15页 |
| ·皮肤样本 | 第13页 |
| ·主要仪器设备 | 第13页 |
| ·试剂耗材 | 第13-14页 |
| ·主要试剂配置 | 第14-15页 |
| ·试验方法 | 第15-19页 |
| ·皮肤的采集 | 第15页 |
| ·皮肤的植块培养 | 第15-16页 |
| ·皮肤细胞的分离 | 第16页 |
| ·皮肤细胞的铺层培养 | 第16-17页 |
| ·培养过程中皮肤成纤维细胞的纯化 | 第17页 |
| ·细胞的贴壁特性、生长特性测试和形态观察 | 第17-18页 |
| ·培养细胞的核型制片 | 第18页 |
| ·细胞的冷冻保存 | 第18-19页 |
| ·冷冻细胞的复苏测试 | 第19页 |
| ·细胞密度和活率测定方法 | 第19页 |
| ·数据处理 | 第19页 |
| 3 结果分析 | 第19-39页 |
| ·细胞分离效果 | 第19-23页 |
| ·酶解过程中组织块的变化 | 第19页 |
| ·不同酶解方法细胞得率和死细胞百分率分析 | 第19-21页 |
| ·细胞得率与死细胞百分率的相关分析 | 第21-22页 |
| ·活细胞得率分析 | 第22-23页 |
| ·细胞种类分析 | 第23页 |
| ·酶解方案结论 | 第23页 |
| ·植块培养 | 第23-24页 |
| ·成纤维细胞的纯化 | 第24-25页 |
| ·基础培养体系(BCS)的培养效果评价 | 第25-33页 |
| ·贴壁特性分析 | 第25-29页 |
| ·生长特性 | 第29-31页 |
| ·细胞形态观察 | 第31-33页 |
| ·染色体数目变异率分析 | 第33页 |
| ·基础培养体系(BCS)中细胞培养效果结论 | 第33页 |
| ·不同胰岛素和EGF水平组成的DME／Ham'sF12培养体系的培养效果评价 | 第33-36页 |
| ·细胞生长特性 | 第33-35页 |
| ·遗传特性分析 | 第35-36页 |
| ·不同胰岛素和EGF水平组成的DME／Ham'sF12培养体系培养效果结论 | 第36页 |
| ·大熊猫皮肤成纤维细胞的核型分析 | 第36-38页 |
| ·大熊猫皮肤成纤维细胞冷冻保存效果分析 | 第38-39页 |
| ·不同冷冻保存液的细胞毒性分析 | 第38-39页 |
| ·不同冷冻保存液保存后细胞的复苏率 | 第39页 |
| 4 讨论与分析 | 第39-45页 |
| ·影响组织细胞分离效果的因素 | 第39-40页 |
| ·细胞原代培养方式的选择 | 第40-41页 |
| ·基础培养液的选择 | 第41-42页 |
| ·EGF和胰岛素对成纤维细胞生长的影响 | 第42-43页 |
| ·培养细胞的遗传稳定性探讨 | 第43-44页 |
| ·细胞冷冻保存效果分析 | 第44-45页 |
| 5 结论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 英文摘要 | 第52-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 附录1: 199／EBSS、DMEM、Ham'sF12、DME／Ham'sF12 1:1培养液的成分 | 第55-56页 |
| 附录2: BTM和BTM-Freeze Medium的成分 | 第56页 |
