| 中文摘要 | 第1-16页 |
| 英文摘要 | 第16-19页 |
| 英文缩写词表 | 第19-22页 |
| 第一章 绪论 | 第22-46页 |
| ·重组抗体的种类 | 第22-23页 |
| ·E.coli 表达系统 | 第23-25页 |
| ·昆虫表达系统 | 第25-28页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第26-27页 |
| ·稳定表达系统 | 第27-28页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统 | 第28-30页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第30-40页 |
| ·甲醇代谢途径和甲醇代谢表型 | 第30-31页 |
| ·表达载体构成元件 | 第31-35页 |
| ·宿主菌 | 第35-36页 |
| ·遗传操作特性 | 第36页 |
| ·表达质粒与酵母基因组整合 | 第36-37页 |
| ·构建多拷贝整合菌株 | 第37-38页 |
| ·高密度发酵 | 第38页 |
| ·分泌蛋白的糖基化 | 第38-40页 |
| ·蛋白表达量 | 第40页 |
| ·抗体表达系统的选择 | 第40-41页 |
| ·抗HBsAg 基因工程抗体研究现状 | 第41-43页 |
| ·本课题的研究背景、意义和主要内容 | 第43-46页 |
| ·研究背景和意义 | 第43-45页 |
| ·主要内容 | 第45-46页 |
| 第二章 抗HBsAg 单链抗体在E. coli 中的表达 | 第46-70页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46-50页 |
| ·菌株和质粒 | 第46-47页 |
| ·引物 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47-48页 |
| ·培养基和溶液 | 第48-50页 |
| ·主要仪器和设备 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-54页 |
| ·质粒的小量提取 | 第50-51页 |
| ·PCR 反应 | 第51页 |
| ·DNA 片段胶回收 | 第51-52页 |
| ·HBscFv 片段克隆至pGEM-3zf | 第52页 |
| ·DNA 序列测定 | 第52页 |
| ·HBscFv 亚克隆至pQE40 | 第52-53页 |
| ·工程菌 M15[pQE-HBscFv]诱导表达 | 第53页 |
| ·Western-blot 分析 | 第53页 |
| ·包涵体的简易复性 | 第53页 |
| ·间接ELISA | 第53-54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-67页 |
| ·构建单链抗体基因 | 第54-56页 |
| ·HBscFv 序列测定结果 | 第56-57页 |
| ·M15[pQE-40]表达系统性质 | 第57-59页 |
| ·构建重组质粒pQE-HBscFv | 第59-61页 |
| ·工程菌 M15[pQE-HBscFv]的表达 | 第61-62页 |
| ·重组HBscFv 的表达类型 | 第62-63页 |
| ·Western-blot 分析结果 | 第63-64页 |
| ·活性测定结果 | 第64-65页 |
| ·HBscFv 在氧化还原系统缺陷型宿主菌中的表达 | 第65-67页 |
| ·小结 | 第67-70页 |
| 第三章 抗HBsAg 单链抗体的纯化及性质鉴定 | 第70-99页 |
| ·引言 | 第70-71页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·菌株和质粒 | 第71页 |
| ·实验动物 | 第71页 |
| ·溶液和试剂 | 第71页 |
| ·层析用品 | 第71-72页 |
| ·主要仪器和设备 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72-75页 |
| ·HBscFv 理化性质预测 | 第72页 |
| ·HBscFv 的表达优化 | 第72页 |
| ·HBscFv 的摇瓶培养 | 第72页 |
| ·包涵体制备 | 第72-73页 |
| ·包涵体纯化 | 第73页 |
| ·包涵体复性 | 第73页 |
| ·重组HBscFv 的活性测定 | 第73-74页 |
| ·重组HBscFv 的亲和常数测定 | 第74页 |
| ·重组单链抗体的理化性质鉴定 | 第74页 |
| ·HBscFv 结构预测 | 第74-75页 |
| ·蛋白质定量 | 第75页 |
| ·结果与讨论 | 第75-97页 |
| ·HBscFv 理化性质预测结果 | 第75-76页 |
| ·HBscFv 表达的最佳诱导时机 | 第76-77页 |
| ·HBscFv 表达的最佳诱导周期 | 第77-78页 |
| ·包涵体纯化结果 | 第78-80页 |
| ·包涵体稀释和透析复性结果 | 第80-81页 |
| ·包涵体透析复性和原位复性结果 | 第81-82页 |
| ·尿素透析复性过程的动态变化 | 第82-83页 |
| ·亲和力测定结果 | 第83-86页 |
| ·重组HBscFv 在转基因小鼠体内的中和活性 | 第86-88页 |
| ·重组HBscFv 分子量测定结果 | 第88-89页 |
| ·等电点测定结果 | 第89-90页 |
| ·肽谱分析结果 | 第90-91页 |
| ·重组HBscFv 末端分析结果 | 第91-92页 |
| ·HBscFv 二级结构预测结果 | 第92-94页 |
| ·HBscFv 三级结构预测结果 | 第94-97页 |
| ·小结 | 第97-99页 |
| 第四章 抗HBsAg 单链抗体在毕赤酵母中的表达 | 第99-123页 |
| ·引言 | 第99页 |
| ·实验材料 | 第99-102页 |
| ·菌株和质粒 | 第99-101页 |
| ·PCR 引物 | 第101页 |
| ·主要试剂 | 第101页 |
| ·培养基和溶液 | 第101-102页 |
| ·实验方法 | 第102-106页 |
| ·HBscFv 亚克隆至pPICZαA | 第102-103页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第103页 |
| ·质粒DNA 的大量制备 | 第103页 |
| ·重组质粒的线形化 | 第103页 |
| ·制备酵母感受态细胞 | 第103页 |
| ·重组质粒转化酵母细胞 | 第103-104页 |
| ·菌落PCR 检测目的基因整合 | 第104页 |
| ·多拷贝转化子的筛选 | 第104页 |
| ·转化菌株的诱导表达 | 第104-105页 |
| ·蛋白质的浓缩 | 第105页 |
| ·制备抗 HBscFv 抗体 | 第105页 |
| ·Western-blot 分析 | 第105页 |
| ·间接ELISA | 第105页 |
| ·制备免疫亲合层析柱 | 第105-106页 |
| ·酵母表达 HBscFv 的纯化 | 第106页 |
| ·PAS 糖蛋白染色 | 第106页 |
| ·结果与讨论 | 第106-120页 |
| ·重组质粒的构建 | 第106-108页 |
| ·pPIC-HBscFv 序列测定结果 | 第108-110页 |
| ·菌落PCR 鉴定酵母转化子 | 第110-111页 |
| ·多拷贝转化子筛选结果 | 第111-112页 |
| ·HBscFv 在毕赤酵母中的表达 | 第112-113页 |
| ·表达上清 Western-blot 分析结果 | 第113页 |
| ·酵母菌体蛋白 SDS-PAGE 分析结果 | 第113-114页 |
| ·表达产物的活性测定 | 第114-115页 |
| ·酵母表达上清的分级沉淀 | 第115-116页 |
| ·酵母表达 HBscFv 的纯化 | 第116-117页 |
| ·酵母表达 HBscFv 性质的初步鉴定 | 第117-120页 |
| ·小结 | 第120-123页 |
| 结论与展望 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-139页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140页 |