| 致谢 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-17页 |
| 一． 固氮菌泌氨相关的遗传控制机制及其基因突变 | 第11-15页 |
| 1． 氮同化代谢相关基因突变与泌氨 | 第11-13页 |
| 2． 铵转运突变与泌氨 | 第13-14页 |
| 3． 固氮负调节基因nifL突变与泌氨 | 第14-15页 |
| 二． 粪产碱菌的固氮基因克隆和功能研究进展 | 第15-16页 |
| 三． 立题依据 | 第16-17页 |
| 材料与方法 | 第17-31页 |
| 一． 实验材料 | 第17-18页 |
| 1． 菌株和质粒 | 第17页 |
| 2． 细菌培养和培养基 | 第17-18页 |
| 3． 酶和生化试剂 | 第18页 |
| 二． 实验方法 | 第18-31页 |
| 1． 粪产碱菌Tn5突变库的构建 | 第18-19页 |
| 2． 泌氨突变株的筛选 | 第19-20页 |
| ① 纳氏试剂目视比色法 | 第19页 |
| ② 水杨酸—次氯酸盐光度法 | 第19-20页 |
| 3． 泌氨突变株生长曲线的测定 | 第20页 |
| 4． 硝酸盐对泌氨突变株生长和泌氨的影响 | 第20页 |
| 5． 导入nifH-lacZ融合基因到突变株 | 第20-21页 |
| 6． β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase）活性的测定（ONPG的测定） | 第21-22页 |
| 7． 乙炔还原法测定固氮活性 | 第22页 |
| 8． 应用~（15）N示踪技术检测突变株的固氮活性 | 第22-23页 |
| 9． 水稻根表定植实验 | 第23-24页 |
| 10． 定植的显微镜检测 | 第24页 |
| 11． 扫描电镜观察 | 第24-25页 |
| 12． 总DNA的提取（CTAB法） | 第25-26页 |
| 13． 突变株nptII-PCR检测 | 第26-27页 |
| 14． 探针的合成和标记 | 第27-28页 |
| 15． 转膜 | 第28-29页 |
| 16． Southern杂交 | 第29页 |
| 17． 免疫反应显色 | 第29-31页 |
| 结果与分析 | 第31-48页 |
| 一． A1501：Tn5突变库的构建 | 第31-32页 |
| 二． 泌氨突变株的筛选 | 第32-35页 |
| 1． 采用纳氏试剂目视比色法筛选泌氨突变株 | 第32页 |
| 2． 泌氨突变株生长曲线的测定 | 第32-34页 |
| 3． 硝酸盐对泌氨突变株生长的影响 | 第34-35页 |
| 三． 同源和异源nifH-lacZ融合基因在泌氨突变株中的表达 | 第35-38页 |
| 1． nifH-lacZ融合基因的导入 | 第35-36页 |
| 2． 同源和异源nifH-lacZ融合基因在突变株中的表达 | 第36-38页 |
| 四． 泌氨突变株固氮酶活性的测定 | 第38-40页 |
| 1． 乙炔还原法 | 第38页 |
| 2． ~（15）N示踪法 | 第38-40页 |
| 五． 泌氨突变株在水稻根表的定殖及nifH-lacZ融合基因的表达 | 第40-46页 |
| 1． 泌氨突变株根表定殖的平板计数 | 第40页 |
| 2． nifH-lacZ融合基因在水稻根表的表达及原位显色观察 | 第40-41页 |
| 3． 泌氨突变株根表定殖的扫描电镜观察 | 第41-46页 |
| 六． 泌氨突变株插入基因位点的分子鉴定和初步定位 | 第46-48页 |
| 1． Tn5转座子插入的PCR分子鉴定 | 第46页 |
| 2． Tn5插入基因位点的初步定位 | 第46-48页 |
| 讨论 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
