| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| ·Mp 概述 | 第15-16页 |
| ·Mp 感染的免疫反应与致病机理 | 第16-18页 |
| ·Mp 的吸附与侵入 | 第16-17页 |
| ·Mp 引起的机体免疫应答反应 | 第17-18页 |
| ·Mp 的分子生物学特性及其表面黏附蛋白 | 第18-21页 |
| ·Mp 的分子生物学特性 | 第18-19页 |
| ·Mp 的表面黏附蛋白 | 第19-21页 |
| ·Mp 的实验室和临床检测 | 第21-23页 |
| ·分离培养 | 第21页 |
| ·血清学方法 | 第21-22页 |
| ·PCR 技术 | 第22-23页 |
| ·多媒体诊断仪器检测支原体 | 第23页 |
| ·密码子优化技术及其应用于 Mp 检测的优势 | 第23-25页 |
| 第二章 P1 黏附蛋白优势表位抗原的密码子优化及克隆表达 | 第25-45页 |
| ·材料与方法 | 第25-34页 |
| ·菌种、载体和工具酶 | 第25页 |
| ·主要试剂、仪器和软件 | 第25-26页 |
| ·主要工作液和培养基 | 第26-28页 |
| ·引物合成和序列测定 | 第28页 |
| ·抗原表位分析与优势表位区段确定 | 第28-29页 |
| ·重叠延伸 PCR 与引物设计 | 第29页 |
| ·目的基因的分段扩增 | 第29-31页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第31-33页 |
| ·工程菌的诱导 | 第33页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-43页 |
| ·黏附蛋白序列检索结果 | 第34页 |
| ·优势抗原表位预测 | 第34-36页 |
| ·优势表位区段密码子分析结果 | 第36-38页 |
| ·P1 优势抗原表位区段基因的密码子优化 | 第38页 |
| ·重叠延伸 PCR 的引物设计 | 第38-39页 |
| ·目的基因的扩增 | 第39-40页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| ·转化大肠杆菌及阳性克隆的鉴定 | 第41页 |
| ·表达条件的优化 | 第41-42页 |
| ·P1 融合蛋白纯化结果和分析 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 P30 蛋白优势表位抗原的密码子优化及克隆表达 | 第45-60页 |
| ·材料与方法 | 第45-49页 |
| ·菌种、载体和工具酶 | 第45页 |
| ·主要试剂、仪器和软件 | 第45页 |
| ·主要工作液和培养基 | 第45-46页 |
| ·引物合成和序列测定 | 第46页 |
| ·抗原表位分析与优势表位区段确定 | 第46页 |
| ·重叠延伸 PCR 与引物设计 | 第46-47页 |
| ·目的基因的分段扩增 | 第47页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·工程菌的诱导 | 第48页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-58页 |
| ·P30 黏附蛋白序列检索结果 | 第49页 |
| ·优势抗原表位预测 | 第49-51页 |
| ·优势表位区段密码子分析结果 | 第51-52页 |
| ·P30 优势抗原表位区段基因的密码子优化 | 第52-53页 |
| ·重叠延伸 PCR 的引物设计 | 第53页 |
| ·目的基因的扩增 | 第53-54页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第54-55页 |
| ·转化大肠杆菌及阳性克隆的鉴定 | 第55-57页 |
| ·表达条件的优化 | 第57页 |
| ·P30 融合蛋白纯化结果和分析 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 P116 蛋白优势表位抗原的密码子优化及克隆表达 | 第60-71页 |
| ·材料与方法 | 第60-63页 |
| ·菌种、载体和工具酶 | 第60页 |
| ·主要试剂、仪器和软件 | 第60页 |
| ·主要工作液和培养基 | 第60页 |
| ·引物合成和序列测定 | 第60-61页 |
| ·抗原表位分析与优势表位区段确定 | 第61页 |
| ·重叠延伸 PCR 与引物设计 | 第61页 |
| ·目的基因的分段扩增 | 第61页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第61-62页 |
| ·工程菌的诱导 | 第62页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-70页 |
| ·P116 黏附蛋白序列检索结果 | 第63页 |
| ·P116 优势抗原表位预测 | 第63-64页 |
| ·优势表位区段密码子分析结果 | 第64-66页 |
| ·优势抗原表位区段基因的密码子优化 | 第66页 |
| ·重叠延伸 PCR 的引物设计 | 第66-67页 |
| ·目的基因的扩增 | 第67页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第67-68页 |
| ·转化大肠杆菌及阳性克隆的鉴定 | 第68-69页 |
| ·表达条件的优化 | 第69页 |
| ·P116 融合蛋白纯化结果和分析 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| 第五章 Mp 蛋白的活性测定和抗原性评价 | 第71-78页 |
| ·材料与方法 | 第71-73页 |
| ·血清样本与主要试剂 | 第71页 |
| ·主要工作液与仪器 | 第71-72页 |
| ·ELISA 法初步检测抗原活性 | 第72页 |
| ·被动凝集法检测血清样本 | 第72-73页 |
| ·结果与分析 | 第73-76页 |
| ·间接 ELISA 法评价 P1、P30、P116 融合蛋白抗原性 | 第73页 |
| ·Mp 三种抗原检测与被动凝集法检测结果的比较 | 第73-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 总结 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录 | 第86-100页 |
| 附录 1. P1 表位抗原区间 110‐480aa 的比对分析 | 第86-89页 |
| 附录 2. P1 表位抗原区间 681‐1106aa 的比对分析 | 第89-92页 |
| 附录 3. P1 表位抗原区间 1154‐1526aa 的比对分析 | 第92-95页 |
| 附录 4. P30 表位抗原区间 23‐274aa 的比对分析 | 第95-98页 |
| 附录 5. P116（16kDa 蛋白）表位抗原区间 80‐135aa 的比对分析 | 第98-99页 |
| 附录 6. P116（116kDa 蛋白）表位抗原区间 761‐960aa 的比对分析 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
