| 内容提要 | 第1-9页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 第一篇 文献综述 | 第11-22页 |
| 第一章 弧菌的致病性及毒力基因的研究进展 | 第11-18页 |
| 第二章 弧菌快速检测方法的研究进展 | 第18-22页 |
| 第二篇 研究内容 | 第22-65页 |
| 第一章 食物中毒性弧菌毒素基因片段的克隆 | 第22-33页 |
| 1 材料与方法 | 第22-29页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·工具酶与试剂 | 第23页 |
| ·其他试剂 | 第23-24页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-29页 |
| ·弧菌的复苏与培养 | 第24-25页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第25页 |
| ·目的基因的扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增产物的回收 | 第26页 |
| ·目的基因的克隆 | 第26-29页 |
| ·重组质粒的序列测定和序列分析 | 第29页 |
| 2 结果 | 第29-32页 |
| ·弧菌的复苏和培养 | 第29页 |
| ·目的基因的扩增 | 第29页 |
| ·目的基因的克隆 | 第29-31页 |
| ·重组质粒的序列测定和序列分析 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32页 |
| ·基因组DNA 克隆方法的选择与确定 | 第32页 |
| ·三个毒素基因片段的PCR 扩增 | 第32页 |
| ·三个毒素基因片段重组质粒的序列测定和序列分析 | 第32页 |
| 4 小结 | 第32-33页 |
| 第二章 三个毒素基因的串联、表达载体构建及表达 | 第33-52页 |
| 1 材料与方法 | 第33-40页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·质粒和菌株 | 第33页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33-34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-40页 |
| ·三个毒素基因片段的串联 | 第34-37页 |
| ·FT 重组表达载体的构建 | 第37-39页 |
| ·FT 的诱导表达 | 第39-40页 |
| 2 结果 | 第40-48页 |
| ·三个毒素基因片段的串联 | 第40-46页 |
| ·三个毒素基因片段的PCR 扩增与串联 | 第40-41页 |
| ·三联融合毒素基因FT 的克隆 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pMD-18T-FT 的序列测定和序列分析 | 第42-46页 |
| ·FT 重组表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·FT 的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·FT 的诱导表达及表达条件的优化 | 第47页 |
| ·融合毒素蛋白表达量的测定 | 第47-48页 |
| ·表达形式的鉴定 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-51页 |
| ·引物中Linker 的设计 | 第48-49页 |
| ·重叠延伸PCR 扩增方法 | 第49页 |
| ·FT 的诱导表达 | 第49-51页 |
| ·宿主-载体系统的选择 | 第49-50页 |
| ·表达条件的优化 | 第50-51页 |
| 4 小结 | 第51-52页 |
| 第三章 间接ELISA 检测方法的建立 | 第52-65页 |
| 1 材料与方法 | 第52-57页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·实验动物 | 第52页 |
| ·抗原 | 第52页 |
| ·抗体 | 第52页 |
| ·菌种 | 第52页 |
| ·标准参照物 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-57页 |
| ·三联融合毒素蛋白包涵体的提取和纯化 | 第53-54页 |
| ·豚鼠抗融合毒素蛋白免疫血清的制备 | 第54-55页 |
| ·琼脂扩散试验测定血清抗体效价 | 第55页 |
| ·间接ELISA 最佳工作条件的确定 | 第55-56页 |
| ·敏感性试验 | 第56页 |
| ·特异性试验 | 第56-57页 |
| ·样品模拟试验 | 第57页 |
| 2 结果 | 第57-62页 |
| ·三联融合毒素蛋白包涵体的提取与纯化 | 第57页 |
| ·琼脂扩散试验测定血清抗体效价 | 第57-58页 |
| ·间接 ELISA 最佳工作条件的确定 | 第58-61页 |
| ·抗原抗体最佳工作浓度的确定 | 第58-59页 |
| ·抗原最佳包被条件的选择 | 第59页 |
| ·最佳封闭条件的选择 | 第59-60页 |
| ·抗原与血清最佳作用时间的确定 | 第60页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第60页 |
| ·酶标二抗与血清最佳作用时间的确定 | 第60页 |
| ·底物作用时间的确定 | 第60-61页 |
| ·敏感性试验 | 第61页 |
| ·特异性试验 | 第61-62页 |
| ·样品模拟试验 | 第62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| ·包涵体 | 第62-63页 |
| ·融合毒素蛋白抗体的特性 | 第63页 |
| ·间接 ELISA 方法 | 第63-64页 |
| 4 小结 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 导师简介 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81-82页 |
| 中文摘要 | 第82-84页 |
| Abstract | 第84-86页 |