| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 第一章 pEGFP-N3-APC真核表达载体的构建 | 第17-52页 |
| ·实验材料 | 第17-19页 |
| ·质粒、菌株 | 第17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·培养基和溶液 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-25页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第19页 |
| ·APC质粒的转化 | 第19页 |
| ·APC质粒的提取 | 第19-20页 |
| ·质粒浓度的测定和鉴定 | 第20-21页 |
| ·引物的设计与合成 | 第21页 |
| ·PCR扩增 | 第21-22页 |
| ·PCR产物纯化及鉴定 | 第22页 |
| ·PCR产物和pEGFP-N3载体的酶切 | 第22-23页 |
| ·连接反应 | 第23页 |
| ·连接产物转化感受态细菌E.coli-TOP10 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第24页 |
| ·重组质粒pEGFP-N3-APC的提取 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pEGFP-N3-APC的酶切鉴定 | 第25页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第25页 |
| ·实验结果 | 第25-47页 |
| ·pBluescript-APC质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·APC片段的扩增 | 第26-27页 |
| ·pEGFP-N3-APC重组真核表达载体构建示意图 | 第27-28页 |
| ·pEGFP-N3真核表达载体 | 第28页 |
| ·扩增出的APC片段及pEGFP-N3载体的双酶切 | 第28-29页 |
| ·重组pEGFP-N3-APC质粒阳性克隆筛选PCR结果 | 第29页 |
| ·重组pEGFP-N3-APC质粒以Xho I和BamH I双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组pEGFP-N3-APC质粒测序及BLAST结果 | 第30-47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| ·APC片段的选择 | 第47-48页 |
| ·pEGFP-N3载体 | 第48-49页 |
| ·重组载体pEGFP-N3-APC的PCR和酶切鉴定 | 第49页 |
| ·重组载体pEGFP-N3-APC的测序鉴定及生物信息学分析 | 第49-50页 |
| ·APC与Axin | 第50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第二章 人结直肠癌细胞转染条件的优化及重组质粒pEGFP-N3-APC对结直肠癌细胞中β-catenin表达的影响 | 第52-83页 |
| ·实验材料 | 第52-55页 |
| ·质粒和细胞 | 第52页 |
| ·主要仪器设备 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·培养基和溶液 | 第53-55页 |
| ·实验方法 | 第55-60页 |
| ·质粒提取及浓度测定 | 第55-56页 |
| ·细胞培养和G418筛选 | 第56页 |
| ·细胞转染 | 第56-57页 |
| ·稳定转染细胞株的筛选 | 第57页 |
| ·RT-PCR测定APC mRNA的表达 | 第57-58页 |
| ·SDS-PAGE电泳鉴定细胞中蛋白的表达 | 第58-59页 |
| ·Western blot检测不同载体对HT-29细胞中β-catenin表达的影响 | 第59-60页 |
| ·实验结果 | 第60-77页 |
| ·质粒的浓度测定 | 第60页 |
| ·G418最低维持浓度的选择 | 第60-61页 |
| ·细胞转染条件的优化 | 第61-66页 |
| ·转染后细胞的显微镜下观察 | 第66-74页 |
| ·SDS-PAGE检测细胞中蛋白的表达 | 第74-75页 |
| ·RT-PCR检测HT-29细胞中APC mRNA的表达 | 第75页 |
| ·Western blot检测重组质粒对HCT 116中β-catenin表达的影响 | 第75-76页 |
| ·Western blot检测重组质粒对HT-29中β-catenin表达的影响 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-81页 |
| ·人结直肠癌细胞株的选择 | 第78页 |
| ·G418筛选 | 第78-79页 |
| ·转染效率 | 第79-80页 |
| ·RT-PCR检测细胞中APC mRNA的表达 | 第80页 |
| ·Western blot检测重组载体pEGFP-N3-APC对人结直肠癌细胞株HCT 116和HT-29中β-catenin表达的影响 | 第80-81页 |
| ·小结 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 综述 | 第87-105页 |
| 成果 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
