| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| ·新城疫的流行现状和存在的问题 | 第11-13页 |
| ·鸡细胞因子作为免疫增强剂的研究进展 | 第13-17页 |
| ·白介素6的研究进展 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18页 |
| 2 试验材料和仪器 | 第18-21页 |
| ·实验动物、疫苗及攻毒保护实验所用毒株 | 第18-19页 |
| ·实验动物 | 第18-19页 |
| ·疫苗 | 第19页 |
| ·攻毒试验所用毒株 | 第19页 |
| ·宿主菌和载体 | 第19-20页 |
| ·化学试剂 | 第20页 |
| ·分子生物学试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第20-21页 |
| ·其它 | 第21页 |
| 3 试验方法 | 第21-29页 |
| ·引物设计 | 第21-22页 |
| ·鸡脾淋巴细胞分离和培养 | 第22页 |
| ·RNA的提取 | 第22页 |
| ·鸡IL-6基因的RT-PCR扩增及鉴定 | 第22-25页 |
| ·鸡IL-6基因的RT-PCR | 第22-23页 |
| ·鸡IL-6基因片段的回收 | 第23页 |
| ·鸡IL-6基因与pMD18-T载体连接 | 第23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23-24页 |
| ·重组质粒ChIL-6的筛选和初步鉴定 | 第24-25页 |
| ·鸡IL-6基因的序列测定与遗传分析 | 第25页 |
| ·生物信息学分析 | 第25页 |
| ·鸡IL-6基因真核表达质粒的构建及鉴定 | 第25-26页 |
| ·鸡IL-6 DNA片段的回收 | 第25页 |
| ·真核表达载体pCI-neo的制备 | 第25页 |
| ·ChIL-6 DNA片段和真核表达载体pCI-neo的连接 | 第25-26页 |
| ·pCI-IL-6重组真核表达质粒的筛选及鉴定 | 第26页 |
| ·pCI-IL-6真核表达质粒的大量制备 | 第26-27页 |
| ·动物试验及分组 | 第27页 |
| ·新城疫HI抗体的测定 | 第27-28页 |
| ·1%鸡红细胞的制备 | 第27页 |
| ·微量血凝试验(HA) | 第27-28页 |
| ·微量血凝抑制试验(HI) | 第28页 |
| ·CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞的测定 | 第28页 |
| ·数据分析 | 第28页 |
| ·攻毒试验 | 第28-29页 |
| 4 试验结果 | 第29-37页 |
| ·鸡外周血淋巴细胞总RNA的提取及完整性鉴定 | 第29页 |
| ·鸡IL-6基因的RT-PCR | 第29-30页 |
| ·鸡IL-6基因的菌落PCR及酶切鉴定 | 第30页 |
| ·菌落PCR | 第30页 |
| ·ChIL-6重组质粒酶切鉴定 | 第30页 |
| ·鸡IL-6基因的序列测定与遗传分析 | 第30-31页 |
| ·生物信息学分析 | 第31-32页 |
| ·亲水性、抗原表位的预测 | 第31页 |
| ·蛋白质二级结构的预测 | 第31-32页 |
| ·鸡IL-6基因真核表达质粒的构建与鉴定 | 第32页 |
| ·动物免疫试验 | 第32-33页 |
| ·HI抗体的测定 | 第33页 |
| ·CD4~+、CD8~+、CD3~+T淋巴细胞测定 | 第33-37页 |
| ·分子免疫佐剂pCI-IL-6联合新城疫LaSota疫苗免疫后CD4~+T淋巴细胞亚群数量的动态变化 | 第33-35页 |
| ·分子免疫佐剂pCI-IL-6联合新城疫LaSota疫苗免疫后CD8~+T淋巴细胞亚群数量的动态变化 | 第35-36页 |
| ·分子免疫佐剂pCI-IL-6联合新城疫LaSota疫苗免疫后CD3~+T淋巴细胞亚群数量的动态变化 | 第36-37页 |
| ·攻毒试验结果 | 第37页 |
| 5 讨论 | 第37-41页 |
| ·鸡IL-6基因的RT-PCR | 第37页 |
| ·鸡IL-6基因的序列分析 | 第37-38页 |
| ·鸡IL-6基因真核表达质粒的构建 | 第38页 |
| ·采用流式细胞技术测定T淋巴细胞亚群的动态变化 | 第38-39页 |
| ·pCI-IL-6真核表达质粒对新城疫LaSota疫苗免疫增强作用 | 第39-41页 |
| 6 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 在读期间发表论文 | 第47页 |
