| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1 成纤维细胞因子21的研究概况 | 第12-19页 |
| ·FGF21的结构 | 第12-13页 |
| ·FGF21的生物学功能 | 第13-17页 |
| ·FGF21的临床安全性与工程化现状 | 第17-19页 |
| 2 非酒精性脂肪肝 | 第19-24页 |
| ·NAFLD的发病机制 | 第20-21页 |
| ·NAFLD的治疗现状 | 第21-23页 |
| ·FGF21与NAFLD | 第23-24页 |
| 3 立题依据及设计思路 | 第24-26页 |
| 第二章 FGF21的克隆表达、纯化及中试研究 | 第26-54页 |
| 1 仪器与材料 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-38页 |
| ·基因的设计、扩增与克隆 | 第27-33页 |
| ·重组蛋白FGF21的表达分析 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白的发酵工艺 | 第34-36页 |
| ·重组蛋白rhFGF21的纯化鉴定 | 第36-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-50页 |
| ·基因的设计、扩增与克隆 | 第38-40页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第40-42页 |
| ·重组蛋白的中试发酵 | 第42-46页 |
| ·重组蛋白的纯化与鉴定 | 第46-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| 第三章 重组人成纤维细胞因子21的体外活性测定 | 第54-65页 |
| 1 仪器与材料 | 第54-55页 |
| 2 实验方法 | 第55-60页 |
| ·小鼠3T3-L1脂肪细胞培养及分化 | 第55页 |
| ·糖吸收活性测定实验 | 第55-57页 |
| ·rhFGF21对3T3-L1脂肪细胞中GLUT1 mRNA表达的影响 | 第57-58页 |
| ·HepG2细胞培养 | 第58-59页 |
| ·促增殖活性测定 | 第59页 |
| ·FGF21对AKT抑制剂(LY294002)引起的细胞存活力变化的影响 | 第59-60页 |
| ·数据分析 | 第60页 |
| 3 实验结果 | 第60-63页 |
| ·3T3-L1分化为成熟的脂肪细胞 | 第60页 |
| ·rhFGF21对3T3-L1脂肪细胞的糖吸收促进作用 | 第60-61页 |
| ·rhFGF21对3T3-L1脂肪细胞GLUT1mRNA表达的影响 | 第61-62页 |
| ·rhFGF21对HepG2细胞的促增殖活性测定 | 第62-63页 |
| ·rhFGF21对LY294002引起的HepG2细胞存活力变化的影响 | 第63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝模型的建立 | 第65-75页 |
| 1 实验仪器与材料 | 第65-66页 |
| ·实验仪器 | 第65页 |
| ·实验动物 | 第65页 |
| ·基础饲料 | 第65页 |
| ·高脂饲料 | 第65-66页 |
| 2 实验方法 | 第66-69页 |
| ·实验动物饲养和分组 | 第66页 |
| ·处死动物,留取标本 | 第66页 |
| ·胰岛素含量测定和生化指标测定 | 第66-67页 |
| ·生化指标测定 | 第67页 |
| ·组织病理学检测 | 第67-69页 |
| ·数据分析 | 第69页 |
| 3 实验结果 | 第69-73页 |
| ·体重及肝指数变化 | 第69-70页 |
| ·血清脂蛋白变化 | 第70页 |
| ·空腹胰岛素含量及稳态胰岛素评价指数 | 第70页 |
| ·肝功能相关酶活改变 | 第70-71页 |
| ·肝脏的组织病理学改变 | 第71-73页 |
| 4 讨论 | 第73-75页 |
| 第五章 RHFGF21对小鼠非酒精性脂肪肝的治疗作用及其机制研究 | 第75-109页 |
| 1 实验仪器与材料 | 第75-76页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第75-76页 |
| ·实验动物 | 第76页 |
| ·基础饲料 | 第76页 |
| ·高脂饲料 | 第76页 |
| 2 实验方法 | 第76-87页 |
| ·实验动物饲养和分组 | 第76页 |
| ·实验动物给药 | 第76-77页 |
| ·处死动物,留取标本 | 第77页 |
| ·血清学指标测定 | 第77-78页 |
| ·肝脏甘油三酯和胆固醇含量测定 | 第78页 |
| ·组织病理学检测 | 第78-80页 |
| ·rhFGF21对实验动物肝脏氧化应激水平的影响 | 第80-84页 |
| ·Western blot检测肝组织中脂代谢相关蛋白的表达 | 第84页 |
| ·Real time RT-PCR检测肝组织中相关基因的表达水平 | 第84-86页 |
| ·数据分析 | 第86-87页 |
| 3 实验结果 | 第87-106页 |
| ·实验动物体重变化 | 第87页 |
| ·实验小鼠的肝指数 | 第87-88页 |
| ·实验动物的空腹血糖(FG)、空腹胰岛素(FINS)和稳态胰岛素评价指数 | 第88页 |
| ·实验动物的血脂测定结果 | 第88-89页 |
| ·实验动物的肝功能相关酶活测定 | 第89-90页 |
| ·实验动物的肝脏胆固醇、甘油三酯含量 | 第90-91页 |
| ·实验动物肝组织病理检查 | 第91-96页 |
| ·rhFGF21对实验动物肝脏氧化应激水平的影响 | 第96-101页 |
| ·rhFGF21对肝组织中脂代谢相关蛋白的表达影响 | 第101-104页 |
| ·rhFGF21对肝组织中脂代谢相关基因表达的影响 | 第104-106页 |
| 4 讨论 | 第106-109页 |
| 小结 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-119页 |
| 附录 | 第119-124页 |
| 附录一:各种试剂和培养基的配制 | 第119-122页 |
| 附录二:DNA测序结果图 | 第122-123页 |
| 附录三:PMF图谱 | 第123-124页 |
| 英文缩略词表 | 第124-125页 |
| 博士期间发表论文 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
