| 提要 | 第1-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-32页 |
| ·自吞噬性程序性细胞死亡 | 第12-17页 |
| ·自吞噬形态学特征 | 第12-14页 |
| ·自吞噬发生过程的分子机制 | 第14-17页 |
| ·凋亡性程序性细胞死亡 | 第17-20页 |
| ·凋亡的分子机制 | 第18-19页 |
| ·线粒体在凋亡中的作用 | 第19-20页 |
| ·细胞凋亡与自吞噬的关系 | 第20-23页 |
| ·Bcl-2 家族与程序性细胞死亡 | 第23-27页 |
| ·Bcl-2 家族的结构和功能 | 第24-26页 |
| ·Bcl-2 基因家族在细胞凋亡与自吞噬中的作用 | 第26-27页 |
| ·氧化应激与程序性细胞死亡 | 第27-32页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第32-47页 |
| ·实验材料 | 第32-34页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·质粒 | 第32页 |
| ·细胞株 | 第32-33页 |
| ·主要试剂及培养基的配制 | 第33页 |
| ·Western Blot 相关试剂 | 第33-34页 |
| ·荧光染色相关试剂配制 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-47页 |
| ·细胞培养 | 第34-35页 |
| ·细胞生长抑制试验-MTT | 第35页 |
| ·Hoechst 33342 检测细胞凋亡 | 第35页 |
| ·蛋白水平分析—Western blot | 第35-38页 |
| ·RT-PCR 半定量分析 | 第38-40页 |
| ·透射电子显微镜检测形态学变化 | 第40页 |
| ·Monodansylcadaverine (MDC) 染色 | 第40-41页 |
| ·吖啶橙(Acridine orange，AO)染色检测细胞酸性空泡积聚 | 第41页 |
| ·pEGFP-C1- Bcl-2 重组质粒的构建 | 第41-44页 |
| ·重组质粒转染及效率检测 | 第44-45页 |
| ·线粒体膜电势检测 | 第45页 |
| ·ROS 检测 | 第45页 |
| ·免疫共沉淀 | 第45-46页 |
| ·统计学处理 | 第46-47页 |
| 第3章 结果 | 第47-77页 |
| ·H_2O_2诱导神经胶质瘤U251 细胞程序性细胞死亡 | 第47-56页 |
| ·MTT 法检测H_2O_2 对细胞生存率的影响 | 第47页 |
| ·Hoechst 33342 染色检测细胞凋亡 | 第47-48页 |
| ·H_2O_2作用后细胞Bax 和Bcl-2 的蛋白表达 | 第48-49页 |
| ·H_2O_2作用后细胞Caspase-3 与Cytosolic cyt c 蛋白的表达 | 第49-51页 |
| ·H_2O_2作用后细胞线粒体融合基因mRNA 表达 | 第51页 |
| ·H_2O_2作用后细胞线粒体分裂基因mRNA 表达 | 第51-52页 |
| ·透射电子显微镜观察细胞自吞噬空泡的形成 | 第52-53页 |
| ·免疫荧光染色检测H_2O_2作用后细胞自吞噬活性变化 | 第53页 |
| ·H_2O_2作用后细胞自吞噬相关蛋白Beclin 1 的表达 | 第53-54页 |
| ·H_2O_2作用后自吞噬上游信号Akt，FKHR，mTOR 和p70S6K 磷酸化蛋白表达 | 第54-56页 |
| ·Bcl-2 的基因克隆和序列分析 | 第56-63页 |
| ·pEGFP-C1-Bcl-2 重组质粒的构建 | 第56-61页 |
| ·pEGFP-C1- Bcl-2 表达质粒转染 | 第61页 |
| ·pEGFP-C1-Bcl-2 绿色荧光蛋白的检测 | 第61页 |
| ·RT-PCR 鉴定U251 Bcl-2 细胞Bcl-2 mRNA 表达 | 第61-62页 |
| ·Western Blot 检测U251 Bcl-2 细胞Bcl-2 蛋白表达 | 第62-63页 |
| ·H_2O_2诱导神经胶质瘤U251 细胞损伤中抗凋亡蛋白Bcl-2 的作用及机制 | 第63-73页 |
| ·MTT 法检测U251 细胞生存率 | 第63-64页 |
| ·RT-PCR 检测线粒体融合基因的变化 | 第64页 |
| ·RT-PCR 检测线粒体分裂基因的变化 | 第64-65页 |
| ·流式细胞术(FCM)检测细胞内活性氧的产生 | 第65-66页 |
| ·Rhodamine 123 (Rh0123) 法检测线粒体膜电势（ΔΨ）的变化 | 第66-67页 |
| ·MDC 染色检测Bcl-2 对自吞噬空泡形成的影响 | 第67-68页 |
| ·Acridine orange 染色检测酸性自吞噬空泡积聚 | 第68-69页 |
| ·Western Blot 检测Akt, FKHR, mTOR 和p70S6K 及其磷酸化形式蛋白表达 | 第69-70页 |
| ·Western Blot 检测LC3 蛋白表达 | 第70-71页 |
| ·Western Blot 检测Beclin 1 蛋白表达 | 第71-72页 |
| ·免疫共沉淀检测Beclin 1 和Bcl-2 蛋白相互作用 | 第72-73页 |
| ·3-MA 或 Z-VAD-FMK 对 H_2O_2 诱导神经胶质瘤 U251 细胞凋亡的影响 | 第73-77页 |
| ·MTT 法检测 3-MA 和 Z-VAD-FMK 对 U251 细胞生存率的影响 | 第73页 |
| ·MDC 染色检测 3-MA 和 Z-VAD-FMK 对自吞噬空泡的形成 | 第73-74页 |
| ·Western Blot 检测 Caspase-3 与 Cytosolic cyt c 蛋白表达的影响 | 第74-75页 |
| ·流式细胞术检测 3-MA 和 Z-VAD-FMK 对 H_2O_2 诱导的 U251 细胞凋亡的影响 | 第75-77页 |
| 第4章 讨论 | 第77-82页 |
| 第5章 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-94页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 中文摘要 | 第97-101页 |
| ABSTRACT | 第101-106页 |
