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鸭圆环病毒的分子流行病学调查及诊断方法的建立

中文摘要第1-16页
英文摘要第16-19页
前言第19-46页
 1、鸡贫血病毒第19-36页
   ·CIAV 的发现和命名第20页
   ·CIAV 的流行和分布第20-21页
   ·CIAV 的形态学特性第21页
   ·CIAV 的理化特性第21-22页
   ·病毒基因组第22-24页
   ·CIAV 编码蛋白的研究第24-29页
     ·ORF3 编码的衣壳蛋白(VP1)第24-26页
     ·ORF1 编码的VP2 的研究第26-28页
     ·ORF2 编码的VP3 的研究第28-29页
   ·CIAV 组织病理学研究第29-31页
   ·CIAV 的致病性第31-32页
   ·诊断方法第32-35页
     ·根据临床症状做初步诊断第32页
     ·依据病理剖检变化进行诊断第32-33页
     ·病原学诊断第33-34页
     ·血清学诊断第34页
     ·分子生物学诊断第34-35页
   ·CIAV 的预防和防制第35-36页
 2、鹦鹉喙羽病毒病第36-42页
   ·PBFDV 的发现和命名第36页
   ·PBFDV 的流行和分布第36页
   ·PBFDV 的形态学特性第36-37页
   ·PBFDV 的理化特性第37页
   ·病毒基因组第37-38页
   ·遗传与分子特征第38页
   ·PBFDV 组织病理学研究第38-40页
   ·PBFDV 的致病性第40页
   ·诊断与防治第40-42页
 3、鸭圆环病毒第42-46页
   ·鸭圆环病毒的发现第42-43页
   ·鸭圆环病毒的危害第43页
   ·鸭圆环病毒的基因组第43-45页
   ·鸭圆环病毒的诊断第45页
   ·本研究主要内容第45-46页
试验研究第46-119页
 试验一 山东省樱桃谷鸭群中鸭圆环病毒及混合感染的流行病学调查第46-64页
  1.材料和方法第47-56页
   ·鸭只收集第47页
   ·细菌分离鉴定第47-49页
     ·E.coli 分离鉴定第47页
     ·RA 分离鉴定第47-49页
   ·DNA 或RNA 提取第49页
     ·DNA 提取第49页
     ·RNA 提取第49页
   ·DuCV 引物及探针标记第49-55页
     ·DuCV 引物第49-50页
     ·DuCV 探针制备第50-55页
   ·PCR 及Dot-blot 敏感性检测第55页
   ·PCR 及RT-PCR 检测第55-56页
     ·PCR 检测第55页
     ·RT-PCR 检测第55-56页
   ·数据分析第56页
  2.结果第56-62页
   ·PCR 及Dot-blot 敏感性分析第56-57页
   ·DuCV、DHV-I、RA 及E.coli 的检测结果第57-60页
   ·DuCV 的阳性率及分析第60-61页
   ·DuCV 与RA、E. coli、DHV-I 混合感染及分析第61-62页
  3.讨论第62-64页
 试验二 鸭圆环病毒全基因组的克隆测序及序列分析第64-76页
  1、材料和方法第65-67页
   ·组织样本第65页
   ·DNA 抽提与纯化第65页
   ·PCR 反应第65-66页
     ·仪器与试剂第65-66页
     ·PCR 条件第66页
   ·PCR 克隆、测序第66-67页
   ·核苷酸和氨基酸序列分析第67页
  2、结果第67-73页
   ·DuCV 特异片段的PCR 扩增第67-68页
   ·DuCV 特异片段的克隆测序及全基因组序列的拼接第68-69页
   ·LY0701、WF0701 株DuCV 基因组结构分析第69-70页
   ·LY0701、WF0701 与其他DuCV 毒株的全基因组序列分析第70-71页
   ·LY0701、WF0701 株与其他圆环病毒Rep 基因同源性分析第71页
   ·LY0701、WF0701 与其他圆环病毒的全基因组、Rep 基因、Cap 基因的同源性分析第71-73页
  3、讨论第73-76页
 试验三 樱桃谷鸭人工感染鸭圆环病毒的病理动态变化第76-91页
  1、材料和方法第77-82页
   ·用于感染健康雏鸭的病料处理第77-80页
     ·样本第77页
     ·无菌检验第77-78页
     ·DNA 抽提与纯化第78页
     ·RNA 抽提与纯化第78页
     ·PCR 与RT-PCR第78-80页
   ·阴性健康雏鸭的选择第80-81页
     ·血液DNA 提取第80-81页
     ·DuCV 检测第81页
   ·人工感染试验第81-82页
   ·人工感染鸭只DuCV 的检测第82页
   ·病理切片制备第82页
  2、结果第82-90页
   ·用于感染的病料检测第82页
   ·鸭只DuCV 检测第82页
   ·人工感染的临床表现第82-83页
   ·人工感染鸭只DuCV 的检测第83页
   ·人工感染鸭只病理表现第83-90页
  3、讨论第90-91页
 试验四 DuCV Cap 蛋白基因原核表达及产物免疫原性研究第91-110页
  1、材料与方法第92-101页
   ·材料第92-94页
     ·载体与受体菌第92页
     ·仪器与试剂第92-93页
     ·引物和模板第93页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试剂第93-94页
   ·方法第94-100页
     ·LY0701 株 Cap 基因原核表达载体的构建第94-96页
     ·重组质粒的提取与初步筛选第96-98页
     ·DuCV-pGEX-Cap 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达第98页
     ·SDS-PAGE第98-100页
     ·重组菌表达产物多克隆抗血清的制备第100页
   ·用于感染健康雏鸭的病料处理第100页
   ·阴性健康雏鸭的选择第100-101页
   ·人工感染试验第101页
   ·间接荧光染色和PCR 法检测含LY0701 株的部分器官组织第101页
   ·间接免疫荧光用于检测临床病例第101页
   2、结果与分析第101-107页
   ·重组表达质粒构建第101-102页
   ·测序结果分析第102-103页
   ·SDS-PAGE 电泳结果第103-104页
   ·用于感染的病料检测第104页
   ·PCR 法检测含LY0701 株的部分器官组织结果第104页
   ·人工感染的组织病理学和间接免疫荧光染色检测DuCV第104-106页
   ·临床病例的间接免疫荧光检测第106-107页
  3、讨论第107-110页
  试验五 探讨 DuCV 在不同组织及细胞中的培养第110-119页
  1、材料和方法第111-116页
   ·阳性样本的来源第111页
   ·DuCV 阴性鸭胚的筛选及健康母鸭群的构建第111页
   ·样本处理第111页
   ·血清中和第111-112页
   ·组织培养和传代第112页
   ·细胞培养和传代第112-116页
     ·培养基及相关试剂的制备第112-113页
     ·细胞制备第113-116页
   ·PCR 检测方法的建立第116页
   ·电镜观察第116页
   ·IFA 检测第116页
  2、结果第116-117页
   ·组织培养和传代结果第116页
   ·细胞培养和传代结果第116-117页
   ·电镜观察第117页
   ·IFA 检测第117页
  3、讨论第117-119页
试验结论与创新点第119-121页
参考文献第121-137页
附录:博士在读期间发表的论文情况第137-138页
致谢第138页

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