中文摘要 | 第1-16页 |
英文摘要 | 第16-19页 |
前言 | 第19-46页 |
1、鸡贫血病毒 | 第19-36页 |
·CIAV 的发现和命名 | 第20页 |
·CIAV 的流行和分布 | 第20-21页 |
·CIAV 的形态学特性 | 第21页 |
·CIAV 的理化特性 | 第21-22页 |
·病毒基因组 | 第22-24页 |
·CIAV 编码蛋白的研究 | 第24-29页 |
·ORF3 编码的衣壳蛋白(VP1) | 第24-26页 |
·ORF1 编码的VP2 的研究 | 第26-28页 |
·ORF2 编码的VP3 的研究 | 第28-29页 |
·CIAV 组织病理学研究 | 第29-31页 |
·CIAV 的致病性 | 第31-32页 |
·诊断方法 | 第32-35页 |
·根据临床症状做初步诊断 | 第32页 |
·依据病理剖检变化进行诊断 | 第32-33页 |
·病原学诊断 | 第33-34页 |
·血清学诊断 | 第34页 |
·分子生物学诊断 | 第34-35页 |
·CIAV 的预防和防制 | 第35-36页 |
2、鹦鹉喙羽病毒病 | 第36-42页 |
·PBFDV 的发现和命名 | 第36页 |
·PBFDV 的流行和分布 | 第36页 |
·PBFDV 的形态学特性 | 第36-37页 |
·PBFDV 的理化特性 | 第37页 |
·病毒基因组 | 第37-38页 |
·遗传与分子特征 | 第38页 |
·PBFDV 组织病理学研究 | 第38-40页 |
·PBFDV 的致病性 | 第40页 |
·诊断与防治 | 第40-42页 |
3、鸭圆环病毒 | 第42-46页 |
·鸭圆环病毒的发现 | 第42-43页 |
·鸭圆环病毒的危害 | 第43页 |
·鸭圆环病毒的基因组 | 第43-45页 |
·鸭圆环病毒的诊断 | 第45页 |
·本研究主要内容 | 第45-46页 |
试验研究 | 第46-119页 |
试验一 山东省樱桃谷鸭群中鸭圆环病毒及混合感染的流行病学调查 | 第46-64页 |
1.材料和方法 | 第47-56页 |
·鸭只收集 | 第47页 |
·细菌分离鉴定 | 第47-49页 |
·E.coli 分离鉴定 | 第47页 |
·RA 分离鉴定 | 第47-49页 |
·DNA 或RNA 提取 | 第49页 |
·DNA 提取 | 第49页 |
·RNA 提取 | 第49页 |
·DuCV 引物及探针标记 | 第49-55页 |
·DuCV 引物 | 第49-50页 |
·DuCV 探针制备 | 第50-55页 |
·PCR 及Dot-blot 敏感性检测 | 第55页 |
·PCR 及RT-PCR 检测 | 第55-56页 |
·PCR 检测 | 第55页 |
·RT-PCR 检测 | 第55-56页 |
·数据分析 | 第56页 |
2.结果 | 第56-62页 |
·PCR 及Dot-blot 敏感性分析 | 第56-57页 |
·DuCV、DHV-I、RA 及E.coli 的检测结果 | 第57-60页 |
·DuCV 的阳性率及分析 | 第60-61页 |
·DuCV 与RA、E. coli、DHV-I 混合感染及分析 | 第61-62页 |
3.讨论 | 第62-64页 |
试验二 鸭圆环病毒全基因组的克隆测序及序列分析 | 第64-76页 |
1、材料和方法 | 第65-67页 |
·组织样本 | 第65页 |
·DNA 抽提与纯化 | 第65页 |
·PCR 反应 | 第65-66页 |
·仪器与试剂 | 第65-66页 |
·PCR 条件 | 第66页 |
·PCR 克隆、测序 | 第66-67页 |
·核苷酸和氨基酸序列分析 | 第67页 |
2、结果 | 第67-73页 |
·DuCV 特异片段的PCR 扩增 | 第67-68页 |
·DuCV 特异片段的克隆测序及全基因组序列的拼接 | 第68-69页 |
·LY0701、WF0701 株DuCV 基因组结构分析 | 第69-70页 |
·LY0701、WF0701 与其他DuCV 毒株的全基因组序列分析 | 第70-71页 |
·LY0701、WF0701 株与其他圆环病毒Rep 基因同源性分析 | 第71页 |
·LY0701、WF0701 与其他圆环病毒的全基因组、Rep 基因、Cap 基因的同源性分析 | 第71-73页 |
3、讨论 | 第73-76页 |
试验三 樱桃谷鸭人工感染鸭圆环病毒的病理动态变化 | 第76-91页 |
1、材料和方法 | 第77-82页 |
·用于感染健康雏鸭的病料处理 | 第77-80页 |
·样本 | 第77页 |
·无菌检验 | 第77-78页 |
·DNA 抽提与纯化 | 第78页 |
·RNA 抽提与纯化 | 第78页 |
·PCR 与RT-PCR | 第78-80页 |
·阴性健康雏鸭的选择 | 第80-81页 |
·血液DNA 提取 | 第80-81页 |
·DuCV 检测 | 第81页 |
·人工感染试验 | 第81-82页 |
·人工感染鸭只DuCV 的检测 | 第82页 |
·病理切片制备 | 第82页 |
2、结果 | 第82-90页 |
·用于感染的病料检测 | 第82页 |
·鸭只DuCV 检测 | 第82页 |
·人工感染的临床表现 | 第82-83页 |
·人工感染鸭只DuCV 的检测 | 第83页 |
·人工感染鸭只病理表现 | 第83-90页 |
3、讨论 | 第90-91页 |
试验四 DuCV Cap 蛋白基因原核表达及产物免疫原性研究 | 第91-110页 |
1、材料与方法 | 第92-101页 |
·材料 | 第92-94页 |
·载体与受体菌 | 第92页 |
·仪器与试剂 | 第92-93页 |
·引物和模板 | 第93页 |
·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试剂 | 第93-94页 |
·方法 | 第94-100页 |
·LY0701 株 Cap 基因原核表达载体的构建 | 第94-96页 |
·重组质粒的提取与初步筛选 | 第96-98页 |
·DuCV-pGEX-Cap 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第98页 |
·SDS-PAGE | 第98-100页 |
·重组菌表达产物多克隆抗血清的制备 | 第100页 |
·用于感染健康雏鸭的病料处理 | 第100页 |
·阴性健康雏鸭的选择 | 第100-101页 |
·人工感染试验 | 第101页 |
·间接荧光染色和PCR 法检测含LY0701 株的部分器官组织 | 第101页 |
·间接免疫荧光用于检测临床病例 | 第101页 |
2、结果与分析 | 第101-107页 |
·重组表达质粒构建 | 第101-102页 |
·测序结果分析 | 第102-103页 |
·SDS-PAGE 电泳结果 | 第103-104页 |
·用于感染的病料检测 | 第104页 |
·PCR 法检测含LY0701 株的部分器官组织结果 | 第104页 |
·人工感染的组织病理学和间接免疫荧光染色检测DuCV | 第104-106页 |
·临床病例的间接免疫荧光检测 | 第106-107页 |
3、讨论 | 第107-110页 |
试验五 探讨 DuCV 在不同组织及细胞中的培养 | 第110-119页 |
1、材料和方法 | 第111-116页 |
·阳性样本的来源 | 第111页 |
·DuCV 阴性鸭胚的筛选及健康母鸭群的构建 | 第111页 |
·样本处理 | 第111页 |
·血清中和 | 第111-112页 |
·组织培养和传代 | 第112页 |
·细胞培养和传代 | 第112-116页 |
·培养基及相关试剂的制备 | 第112-113页 |
·细胞制备 | 第113-116页 |
·PCR 检测方法的建立 | 第116页 |
·电镜观察 | 第116页 |
·IFA 检测 | 第116页 |
2、结果 | 第116-117页 |
·组织培养和传代结果 | 第116页 |
·细胞培养和传代结果 | 第116-117页 |
·电镜观察 | 第117页 |
·IFA 检测 | 第117页 |
3、讨论 | 第117-119页 |
试验结论与创新点 | 第119-121页 |
参考文献 | 第121-137页 |
附录:博士在读期间发表的论文情况 | 第137-138页 |
致谢 | 第138页 |