| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| ·研究背景 | 第14-21页 |
| ·幽门螺杆菌Cag致病岛 | 第14-15页 |
| ·癌蛋白CagA的致癌机理 | 第15-16页 |
| ·CagA蛋白的转运机制——Ⅳ型样分泌装置 | 第16-19页 |
| ·细胞壁的屏障作用和肽聚糖水解酶 | 第19-20页 |
| ·细菌的分泌转运装置与肽聚糖水解酶 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的、内容及其技术路线 | 第21-24页 |
| ·研究目的 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 幽门螺杆菌hp0523基因的克隆及其序列分析 | 第24-34页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·菌株和载体 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要溶液 | 第24-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-30页 |
| ·H.pylori的培养与鉴定 | 第26页 |
| ·H.pylori基因组DNA的制备 | 第26-27页 |
| ·PCR引物的设计 | 第27页 |
| ·PCR反应 | 第27页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第27-28页 |
| ·氯化钙法制备感受态细胞 | 第28页 |
| ·目的片段的T-A克隆 | 第28-29页 |
| ·转化与筛选 | 第29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒中目的基因序列测序 | 第30页 |
| ·hp0523基因的序列分析 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-32页 |
| ·hp0523基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·蛋白的理化特性预测分析 | 第31页 |
| ·hp0523基因在不同菌株间的比较 | 第31页 |
| ·蛋白质功能预测与二级结构分析 | 第31-32页 |
| ·GenBank登陆号 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 幽门螺杆菌hp0523基因在大肠杆菌中表达、产物的纯化及其活性的鉴定 | 第34-46页 |
| ·材料 | 第34-38页 |
| ·菌株和载体 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要溶液 | 第35-37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-41页 |
| ·原核表达载体pET-28a-hp0523的构建 | 第38页 |
| ·蛋白诱导表达和鉴定 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白可溶性分析 | 第39页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第39页 |
| ·蛋白的复性 | 第39页 |
| ·细菌肽聚糖的提取 | 第39-40页 |
| ·溶菌斑点实验 | 第40页 |
| ·凝胶酶谱分析 | 第40页 |
| ·细菌浊度实验 | 第40-41页 |
| ·结果 | 第41-44页 |
| ·原核表达载体pET-28a-hp0523的构建 | 第41页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第41-42页 |
| ·溶菌活性的鉴定 | 第42-43页 |
| ·肽聚糖水解活性的鉴定 | 第43页 |
| ·水解底物的特异性检测 | 第43-44页 |
| ·不同pH条件下的酶活性变化 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 幽门螺杆菌hp0523基因的缺失及其对CagA蛋白转运能力的影响 | 第46-54页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·细胞、菌株和载体 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要溶液 | 第46-47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-49页 |
| ·细菌和细胞的培养 | 第47页 |
| ·自杀质粒同源臂片段的扩增 | 第47-48页 |
| ·自杀质粒pBlueKM40/△hp0523::Km~r的构建 | 第48页 |
| ·hp0523基因缺失株的构建 | 第48-49页 |
| ·hp0523基因缺失株的鉴定 | 第49页 |
| ·CagA蛋白转运实验 | 第49页 |
| ·CagA蛋白表达水平 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-51页 |
| ·hp0523基因缺失自杀质粒的构建 | 第49-50页 |
| ·hp0523基因缺失株的鉴定 | 第50页 |
| ·hp0523基因缺失前后对CagA蛋白转运能力的影响 | 第50-51页 |
| ·hp0523基因缺失前后对CagA蛋白表达的影响 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| 第五章 主要结论和展望 | 第54-56页 |
| ·主要结论 | 第54页 |
| ·展望 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 攻读硕士期间发表论文和参加课题 | 第64页 |
